Actividad enzimatica

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INTRODUCCION

Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas necesarias para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no fuera por la participación de las enzimas, algunas reacciones no se producirían tan rápido.

Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos que agilizanuna reacción que envuelve la formación o rompimiento de enlaces químicos.
Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual no se necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando un complejo enzimasustrato; esto ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio activo de la enzima. Las enzimas son muy selectivas porque pocasmoléculas pueden interactuar bien con este sitio

• Hidrólisis de gelatina
La mayoría de los polímeros son demasiado grandes para ser transportados dentro de las células. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que hidrolizan esos polímeros transportando al interior de la célula en monómeros que les sirven para crecer.
La producción de proteasas es evaluada por incorporación de unaproteína (gelatina o caseína) en un medio sólido en placa. La placa se inunda con ácido que precipita la proteina no hidrolizada.

• Hidrólisis de grasas
Algunas bacterias excretan lipasas extracelulares que pueden hidrolizar lípidos grandes en sustratos de bajo peso molecular que son trasportados al interior de la célula para ser utilizados en el crecimiento.
Una emulsión de lípidos y unindicador llamado Spirit Blue se incorporan en un medio sólido complejo.

• Hidrólisis del almidon
Los polisacaridos, como el almidón son demasiados largos para ser transportados al interior de la célula. Los microorganismos excretan amilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligo o monosacáridos que pueden usarse como sustratos para crecer.

La hidrólisis de almidón es analizada en mediosconteniendo almidón en placa. Después de incubar se inundan las placas con lugol que al unirse con el almidón intacto forma un complejo púrpura.

OBJETIVOS

1. Explicar qué es una enzima y cómo éstas actúan en reacciones intracelulares.

2. Identificar factores que afectan la actividad enzimática.

3. Distinguir entre inhibición competitiva e inhibición no-competitiva

MATERIALES

• Medios decultivos: placas de agar almidon, agar gelatina, agar caseina, agar grasa.

• Asa de kolle.

• Mechero.

• Cultivo de microorganismos de 18 horas.

PROCEDIMIENTO

• Con un plumon marcador dividir la base de la placa en cuatro secciones, enumerarlos como I, II, III y IV.

• Utilizando el asa de kolle, colocar una estria de cada cultivo en un cuadrante. Dejar el primer cuadrante comocontrol.

• Invertir las placas e incrustar a 37º C por 18 – 24 horas.

Después de la incubacion determinar los resultados de la prueba como sigue:

a) hidrólisis de almidon

• cubrir lasuperficie de la placa con solucion de lugol.

• Las zonas claras o transparentes alrededor de las colonias bacterianas indican la hidrólisis del almidon. Anotar sus resultados en el cuadro de conclusiones.b) hidrólisis de la gelatina

• cubrir la superficie de la placa de agar gelatina con HgCl2 por 5´.

• La actividad actividad de la gelatinasa se indica por medio de zonas transparentes alrededor de las colonias. La zona opaca del medio se debe a la gelatina precipitada.

• Anotar las conclusiones en la seccion de resultados y observaciones.

c) hidrólisis de la caseina

• observarzonas claras de hidrólisis alrededor de las colonias que indican la degradacion de la caseina. Para incrementar el contraste, se puede utilizar tambien HgCl2.

d) hidrólisis de los lipidos

• cubrir la superficie dl medio con SO4Cu2.

• Un color verde azulado alrededor de las colonias indica la producción de la enzima lipasa.

Resultados

microorganismo Agar almidon Agar caseina Agar...
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