Adn de levadura

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EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ADN DE LEVADURA
DIANA GARCÍA
PABLO ANDRÉS CORAL
UNIVERSIDAD DE NARIÑO
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
RESUMEN: Se realizó una práctica de extracción y caracterización de ADN a partir de levadura por un método consistente en cuatro pasos; el rompimiento celular se llevo a cabo con arena y la extracción inicial del ADN se llevo a cabo en baño de hielo con SDS y EDTA.La desnaturalización de las proteínas se llevo a cabo con una solución de cloroformo-alcohol isoamílico y posterior centrifugación a 3000 rpm. La extracción final del ADN se logro mediante precipitación con etanol. El ADN obtenido correspondió a un sólido de color amarillo y apariencia coloidal muy soluble en agua. Las pruebas de caracterización de ADN fueron positivas para la identificacióngeneral de ADN por el método de Feulgen-Schiff y la prueba de fosfatos. La prueba de desoxipentosas con difenilamina presentó un resultado negativo debido a la contaminación del reactivo de difenilamina, debido a esto se utilizó una prueba con el reactivo de Bial que presentó un resultado positivo.

INTRODUCCIÓN
La información que permite vivir a los seres vivos está contenida en los ácidosnucleícos. Estos son macromoléculas compuestas por nucleótidos, que tienen en su estructura un azúcar (ribosa o desoxirribosa), una base nitrogenada (adenina, guanina, citosina, timina, uracilo) y un grupo fosfato. En principio, según el azúcar que forma su esqueleto se distinguen dos tipos de ácidos nucleícos: el ADN, con desoxirribosa y el ARN, con ribosa. El ADN contiene la información genéticanecesaria para la síntesis de las proteínas que forman los seres vivos y llevan a cabo todos los procesos fisiológicos de los seres vivos. El ARN tiene diversas funciones siendo una de las principales el transporte de la información desde el ADN hasta la maquinaria donde se producen las proteínas. A nivel estructural encontramos que mientras el ADN se encuentra mayoritariamente formado por una doblehélice con dos hebras complementarias, el ARN está formado por moléculas de una sola hebra que se pliegan sobre sí mismas adquiriendo estructuras internas.(1)
En su estructura secundaria, y de acuerdo a los diversos estudios fisicoquímicos, el ADN en solución acuosa ha demostrado que se trata de un polímero de elevado peso molecular (5 x 106) y que ofrece una configuración más bien rígida ydistendida. Entre las consecuencias de su elevado peso molecular y de la rigidez de sus moléculas se destaca la elevada viscosidad de las soluciones acuosas de ADN. Una solución de ADN tiene una densidad mucho mayor que la del agua. Otra consecuencia de las citadas propiedades de la molécula de ADN es la gran facilidad con que las fuerzas de fricción reducen su peso molecular por rotura de su cadena.Es prácticamente imposible obtener a partir de material biológico ADN sin que tenga cierto grado de fricción, por lo que es muy probable que los pesos moleculares del ADN aislado (5 x 106) tengan poco que ver con el tamaño de la molécula del ADN in vivo.
El ADN fibroso aislado tiene un modelo de difracción de rayos X muy neto, indicio experimental directo de una estructura secundaria muy regular.Watson y Crick propusieron en 1953 una estructura secundaria del ADN, que dedujeron de éstos modelos de difracción de rayos X, y que estaban de acuerdo con las observaciones de Chargaff, mostrando que ciertos pares de base de ADN, se presentan en cantidades equimoleculares. Esta estructura de Watson y Crack está constituida por dos cadenas de ADN que se enrollan helicoidalmente en torno a un ejecentral común, originando una molécula de cadena doble y de unos 20 Å de diámetro. Las cadenas de azúcar-fosfato están situadas en la parte externa de estas hélices orientadas con dirección de enrollamiento a la derecha; las bases purínicas y pirimidínicas se encuentran enlazadas por puentes de hidrógeno, en la parte interna de las citadas hélices, con los planos de sus anillos orientados...
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