Adn a 260 nm

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  • Publicado : 15 de octubre de 2010
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Se determina la purificación del DNA utilizando un espectrofotómetro de luz ultra violeta a una longitud de onda de 260 nm, debido a que lasbases puricas y pirimidicas del DNA tiene propiedades de absorber la luz ultra violeta a esa longitud de onda.
La estabilidad del DNA se debe a laestructura de doble hebra helicoidal de los ácidos nucleicos donde las bases están unidas por puentes de hidrogeno que las mantienen apareadas.Al elevarse la t°, los puentes de hidrógenos se rompen y la molécula pasa de un estado ordenado "nativo" a uno desordenado y de hebra simple"desnaturalizado". La desnaturalización del DNA puede detectarse por el aumento de absorción de la luz ultra violeta a una longitud de onda de 250 nm.Los anillos heterocíclicos de las bases del DNA absorben mayor cantidad de luz cuando no están apilados no forman puentes de hidrogeno en elinterior de la doble hélice. Este fenómeno se denomina hipercromicidad y se manifiesta de forma que el DNA desnaturalizado absorbe un 37% más deluz a 260 nm que en su forma helicoidal y apareada. En el caso que el DNA estuviera contaminado por factores externos se puede determinar lapurificación de éste a través de un cociente dependiendo del contaminante.
Ej. Si fuera proteína: estas tiene una absorbencia de 280 nm, se hace elcociente de A260/A280 .y así se determina la purificación del DNA sin el contaminante obteniendo como resultado un cociente de 1,8 a 2,0 aprox.
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