Aislamiento Bacterias Gram +

Informe de laboratorio Nº 1
Microbiología agrícola y ambiental

Presencia de los microorganismos en el ambiente
Observación, aislamiento y cultivo

Docente: Olga Correa
Alumno: Lucia María Buraschi
Entrega: 03/05






2012

Introducción

La microbiología es el estudio de los microorganismos, que existen como células aisladas o agrupaciones celulares.
El estudio de losmicroorganismos es un método de alta importancia e innumerables aplicaciones en todos los ámbitos de la actividad humana.
Para lograr un cultivo puro, necesitamos aislar el microorganismo, para un estudio en profundidad del mismo. Las técnicas de aislamiento más comunes son el estriado en superficie y las diluciones sucesivas.
Luego de aislar un cultivo, debemos hacerlo crecer. El crecimiento de unmicroorganismo se define como el incremento del número de células del mismo y se ve modificado por diversos factores ambientales como PH, temperatura, luz, humedad, niveles de oxígeno; poseyendo cada microorganismo un óptimo para cada factor. Por otro lado, el aumento de tamaño por acumulación de sustancias de reserva no es considerado crecimiento.
El aislamiento y crecimiento se realizan endiversos medios de cultivo, los cuales se pueden clasificar según su composición o su función. Es muy importante que todos los medios de cultivo y materiales de laboratorio estén debidamente esterilizados.
En este trabajo aplicaremos diversos métodos de aislamiento y cultivo de bacterias, como lo son el estriado, la incubación, el pico de flauta y la coloración de Gram. Esta última es de considerableimportancia ya que se utiliza para demostrar las propiedades de tinción de bacterias de todo tipo, permitiendo su posterior clasificación en Gram - y Gram + según el tipo de pared celular que posean (Koneman et al, 2008).
En el primer grupo, la pared está formada por: -una capa delgada de peptidoglicano (poli péptidos unidos a polisacáridos), -un espacio periplásmico y -en la cara externa, una capade lico polisacáridos y proteínas. Al hacerse en el laboratorio una tinción de Gram resultará de color rojo.
Mientras que las Gram positivas, resultarán de color violeta oscuro a la tinción porque tienen su pared compuesta de una capa gruesa de peptidoglicano. Ésta estructura, le otorga resistencia; y además tiene cadenas de ácido teicoico para recibir señales.Objetivos

Analizar la presencia y distribución de los microorganismos mediante la siembra de diferentes muestras ambientales en placas de Petri con medio de cultivo sólido.
Obtener un aislamiento bacteriano exitoso.
Caracterizar el microorganismo aislado mediante tinción de Gram y observación microscópica.
Familiarizarse con los materiales de laboratorio y los procedimientos utilizados.Materiales y métodos

Siembra de muestras
Para realizar la siembra de muestras se utilizaron dos placas de Petri con medio de cultivo agar nutritivo (AN) y una tercera con agar extracto de malta (AEM). En esta última se sembró una muestra apoyando el dedo sobre el agar, que se dejo en contacto con el aire por unos instantes. Se repitió este procedimiento con una de las placas con medio decultivo agar nutritivo. En la placa restante (AN) se sembró con una hoja, evitando el contacto con el ambiente lo máximo posible. Estas tres placas fueron incubadas a 28-30°C durante un período de siete días aproximadamente.

Aislamiento de colonias por estriado
Se selecciono de la paca de Petri sembrada con una hoja (AN) la colonia que se consideró más aislada, para realizar el aislamiento dela misma. Con un ansa esterilizada a la llama del mechero, se tomo una alícuota de esta colonia y se realizo el aislamiento por estriado en una placa de Petri nueva, con medio de cultivo agar nutritivo (AN).
A medida que se van haciendo estrías en zigzag, cada vez se depositan menos microorganismos. A continuación, se esteriliza nuevamente el ansa en la llama del mechero, se toca en la región...