Aislamiento de dna

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  • Publicado : 14 de agosto de 2012
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1.- Describir y explicar porque se realiza cada paso durante el aislamiento

Al homogenizar 8 gramos del higado de pollo con los 20 ml de SAS (tris 0.01M, sacarosa 0.3M, cloruro ddemagnesio 0.005 m, beta-mercaptoetanol 0.005 m) se busca la separacion de diversos componentes que no queremos ver en esta practica, reaccionando y disolviendo algunas otrassustancias, para el pre aislamiento del DNA.
Pasar la mezcla homogenizada a travez de la gasa doble, nos permite filtrar las moleculas y particulas de mayor tamaño, y al ser expremidas, nospermite deshacernos de la humedad y liquidos retenido en ella.
El centrifugado durante los 5 minutos que se realizo a 3000 revoluciones por minuto, nos permitio separar las soluciones,para asi dejar una pastilla en el fondo del tubo, la cual contiene concentradamente nuestras sustancias de importancia.
Despues de la centrifugacion se debe de desechar los sobrantesy solo se debe de dejar la pastilla formada en el fondo del tubo, para despues volver a suspender esta pastilla en 5 milimetros de tris 0.4 m pH 8.5.
Paso seguido se añadieron 5 ml.de lauril sulfato de sodio al 4% y se vuelve a homogenizar con una varilla de vidrio, cabe recalcar que se debe de homogenizar de la mejor y mas profusa forma posible, puesto que lahomogenizacion debe de ser perfecta.
Despues de esto se agregan 0.5 ml. de EDTA salino y se homogeniza, para la reaccion de algunos componentes de la solucion.
Se le añade 1 ml desolucion CSC y se homogeniza.
Se vierte el contenido del tubo lentamente en un vaso de precipitado con etanol frio. El DNA asciende como una sustancia blanquecina parecida a la nata.Despues se procede a sacar el DNA con una varilla de vidrio eliminando al etanol al presionar con la pared del vaso
Se redisuelve el DNA con 10 ml de CSC y se guarda en el refrigerador.
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