Aislamiento de enterobacterias

Práctica nº 5
AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

INTRODUCCION
Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios de laboratorio, se llaman cultivos. Las diferentes especies de bacterias que se desarrollan en la misma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muy diferentes, y por lo tanto el conocimiento de la apariencia, o de las características del cultivo de lasespecies es útil para reconocer ciertos tipos de bacterias; asimismo, nos puede servir como un medio que haga posible identificar las especies. Las bacterias pueden ser obtenidas en cultivo puro para determinar las características del cultivo o cualquier otra propiedad de la especie.

Las enterobacterias son Gram negativas y contienen más de 30 géneros y más de 100 especies que pueden tenermorfología de bacilos o cocos. Los miembros de esta familia forman parte de la microbiota del intestino (llamados coliformes) y de otros órganos del ser humano y de otras especies animales. Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuáticos.
Para cultivarlas se hace sembrado en forma de estría, se cultiva a 37º C de 18-24hrs, para posteriormente refrigerar.

Medios para Gramnegativo
Verde brillante
- Substancia inhibidora de Gram positivos, coliformes y mayoría de Shigella
- Sustrato: lactosa y sucrosa
- Colorante indicador: rojo de fenol
- Apariencia de las colonias:
* Colonias fermentadoras de lactosa se tornan verde amarillento (coliformes)
* Colonias no fermentadoras son rosas o rojas

Salmonella Shigella
- Sustancia inhibidora: citrato de Na,tiosulfito de Na, verde brillante
- Inhibe Gram positivo, coliformes y algunas shigellas
- Sustrato: lactosa
- Colorante indicador: rojo neutro
- Apariencia de las colonias:
* Colonias fermentadoras son rosas o rojas
* Colonias no fermentadoras son incoloras

Mac Conkey
- Sustancia inhibidora: sales biliares y cristal violeta
- Organismos inhibidos: Gram positivas, aunque permite elcrecimiento de estafilococo y enterococo
- Sustrato: lactosa
- Colorante indicador: rojo neutro
- Apariencia de las colonias:
* Colonias fermentadoras de lactosa son rosas o rojas
* Colonias no fermentadoras son incoloras u opacas

Eosina azul de metileno
- Sustancia inhibidora: eosina azul de metileno
- Organismos inhibidos: Gram positivos
- Sustrato: lactosa y fructosa
- Coloranteindicador: eosina azul de metileno
- Apariencia de las colonias:
* Colonias fermentadoras de lactosa son café oscuras o con el centro negro.
* La E. Coli toma apariencia verde metálico
* Colonias no fermentadoras de lactosa son incoloras

Triple azúcar de hierro
- Es un medio solido de superficie inclinada de color rojo
- Debe:
* sembrarse por picadura en el fondo
* estriaren la superficie
* incubarse con el tapón flojo
- Sustrato: lactosa, glucosa y fructosa, sulfato ferroso
- Colorante indicador: rojo de fenol
- Se utiliza para determinar la fermentación de carbohidratos y producción de ác. Sulfhídrico
- Se usa como primer paso para identificación de bacilos y cocobacilos Gram negativos
- 18 - 24 hrs de incubación
- Si cambia de color rojo a amarillopresenta fermentación de carbohidratos
- Si presenta huecos hay fermentación

Nº de reacción | Apariencia | Causas |
1 | Fondo amarilloSuperficie amarillaHuecos en el fondoSin zonas negras | Fermentación de sucrosa y lactosa; conformación de ac. y gas. |
2 | Fondo amarilloSuperficie rojaHuecos en el medioCon zonas negras | Fermentación parcial de azucares con producción de ac y gas por acsulfhidrico |
3 | Fondo amarilloSuperficie rojaCon o sin huecosSin zonas negras | Fermentación parcial de azucares con producción de ac. y en ocasiones gas |
4 | Fondo amarilloSuperficie amarillaCon o sin huecosCon zonas negras | Fermentación de fructosa, sucrosa o lactosa;Con formación de ac.Producción de ac. sulfhídrico |
5 | Fondo rojoSuperficie rojaSin huecosSin zona negra | No...