Aislamiento de glucogeno epatico

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Introducción
El glucógeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos en los animales, se encuentra en proporción mayor en el hígado (hasta 6%) y en el músculo, donde rara vez excede de 1%. Sin embargo, debido a su masa mayor, el músculo almacena tres a cuatro veces la cantidad de glucógeno que tiene el hígado como reserva. Al igual que el almidón, es un polímero ramificado dealfa-glucosa.
En las células hepáticas, el glucógeno aparece en forma de grandes gránulos, constituidos por agrupaciones de simples moléculas, muy ramificadas, por lo que tiene un peso molecular muy elevado. A semejanza de la amilopectina, el glucógeno es un polisacárido de la D-glucosa con enlaces alfa 1-4, sin embargo, está más ramificado, y su molécula es más reducida que la amilopectina; lasramificaciones aparecen cada 8 a 12 residuos de glucosa.
El glucógeno puede aislarse de los tejidos animales digiriéndolos con disoluciones calientes de KOH en las que los enlaces no reductores alfa 1-4 y alfa 1-6 son estables.
El hígado actúa fundamentalmente como un "glucostato", sensor de las concentraciones de glucosa sanguínea que ajusta en función de ello la síntesis y degradación deglucógeno; gran parte de esta regulación comporta el control de la glucógeno sintasa y la fosforilasa.
Para cumplir esta función, el hígado contiene unas reservas de glucógeno relativamente elevadas, desde un 2 a un 8% del peso del órgano. En el hígado, la velocidad máxima de síntesis y degradación de glucógeno son aproximadamente iguales, mientras que en el músculo la velocidad máxima deglucogenólisis supera a la síntesis de glucógeno en unas 300 veces.
Aunque la enzimología de la síntesis y degradación del glucógeno es semejante en el hígado y el músculo, el control endocrino del hígado es bastante diferente. Las enzimas difieren también estructuralmente.

Objetivos
* Extraer glucógeno de una muestra de hígado de pollo.
* Observar el efecto de la alimentación sobre elrendimiento de extracción de glucógeno de hígado de pollo.
* Obtener glucosa por hidrólisis ácida del glucógeno extraído de hígado de pollo.
* Comprobar la presencia de glucosa por medio de la prueba de Fehling en las muestras de hígado de pollo.
Materiales y métodos
* Tubos para centrífuga
* Tubos de ensaye
* Pipetas Pasteur
* Propipetas
* Mechero de Bunsen
*Malla de asbesto
* Pipetas graduadas
* Vasos de precipitados
* Centrífuga
* Potenciómetro
* Balanza digital
*Reactivos
* KOH al 30% (p/v)
* Na2SO4 al 15% (p/v)
* Alcohol etílico
* H2SO4 5N
* Fenolftaleína (en etanol)
* CuSO4 al 1% (p/v)

Procedimiento
a) Extracción del glucógeno de una muestra hepática.
1. Pesar aprox. 1 g dehígado de pollo. Registrar el peso exacto.
2. Introducir los fragmentos de hígado en dos tubos de ensaye. Añadir a cada tubo 2 ml de KOH al 30 %. Incubar los tubos en un baño de agua hirviendo durante 15 minutos con agitación ocasional, hasta la completa digestión del tejido (que no queden partículas en suspensión).
3. Centrifugar 5 minutos a 3000 rpm para eliminar los restos de tejidono digerido.
4. Pasar cuidadosamente los sobrenadantes (con una pipeta o por decantación) a dos tubos para centrífuga, a los cuales se les añaden 0, 2 ml de Na2SO4 al 15%, y 4 ml de alcohol etílico. Agitar cuidadosamente la mezcla para poner en contacto todos los componentes. Dejar reposar en hielo de 15 a 20 minutos, para provocar la precipitación del glucógeno extraído.
5. Centrifugar5 minutos a 3000 rpm para sedimentar el glucógeno. Desechar con sumo cuidado el sobrenadante y retener el precipitado o sedimento de color marrón-blanco, puesto que esto es el glucógeno.
Nota: La purificación completa del glucógeno implicaría tres o cuatro precipitaciones alcohólicas y una precipitación ácida, pero en ésta práctica sólo se realizará una precipitación alcohólica.
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