Aislamiento y purificacion de la lactoalbumina

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PROPUESTA TRABAJO EXPERIMENTAL LABORATORIO BIOQUÍMICA QIM-117
PROTEÍNAS, α-LACTOALBÚMINA
Integrantes del grupo:
Integrante 1:
Integrante 2:

OBJETIVO GENERAL: Aislar y purificar una proteína de la leche
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
1. Aislar y purificar la proteína α-lactoalbúmina de la leche
2. Cuantificar la proteína α-lactoalbúmina de la leche
FUNDAMENTOS:
Para realizar elestudio de la composición y estructura de las proteínas, estas se deben aislar y purificar.
Cada proteína tiene una secuencia diferente de aminoácidos lo cual las hace distintas unas de otras. Es por ello que los Métodos de separación se encuentran basados en las propiedades que presentan proteínas frente a, diferentes solventes, cambios de PH, etc. La solubilidad y la composición específica deaminoácidos nos dan cuenta de estas diferencias. Y con ello la solubilidad que presentan en diversos solventes de acuerdo a su estructura. Las proteínas fibrosas por ejemplo, serán solubles en agua y en soluciones con relativa fuerza iónica, en cambio las proteínas globulares serán más solubles en agua y en soluciones menor fuerza iónica. De acuerdo a lo anterior podemos diferenciar a lasproteínas según su estructura en fibrosas y globulares
La secuencia de aminoácidos nos permite diferenciarlas según el comportamiento que presenta cada proteína al alcalinizarlas o acidificarlas, ya que estas al alcanzar su punto isoeléctrico precipitan y nos permite separarlas, convirtiéndose este método en una de los métodos de separación más simples. (1)

El sistema proteínico de la lechese encuentra constituido principalmente por Las caseínas (80% de las proteínas de la leche); de las cuales el 50% aproximadamente es de alfa-caseínas, 30% de beta-caseína, 15% de k-caseína y 5% de gama-caseína. Estos compuestos pueden separarse por ultra centrifugación y precipitar cuando se acidifica la leche a un PH =4.6,(cuando alcanza el punto isoeléctrico) se coagulan las caseínas, quedandoen solución las otras proteínas; conjuntamente con la lactosa y sales minerales para constituir el llamado lactosuero, constituido por Beta-lactoglobulina ( 10% de las proteínas totales), alfa-lactoalbúmina ( 2% de las proteínas totales) y pequeñas cantidades de diversas proteínas (enzimas, inmunoglobulinas, etc.) (2).

La alfa-lactoalbúmina es una proteína globular, de 123 aminoácidos, rica entriptófano y lisina, es una de las proteínas del sistema lactosa-sintetasa, presente en las células de las glándulas mamarias.

Es una proteína ácida con un punto isoeléctrico de alrededor de 4,8, insoluble a pH entre 4 y 5,5, a un lado y a otro lado de esta zona, la molécula es sensible a los cambios de temperatura ya que depende del agua de hidratación esta sufre modificaciones deconformación, rápida o lenta, reversibles o no, que conducen a diversas formas polimerizadas. (3)


El método escogido para el practico a realizar se basa en” precipitación selectiva de proteínas” utilizando ácidos, bases y temperatura .Existen ciertas propiedades que son aprovechadas para aislar y purificar proteínas tales como; alteración en la carga neta de la proteína, por modificación del PH,Desnaturalización o renaturalización de proteínas por cambios en el PH y la temperatura. También la manipulación de carga, tamaño y solubilidad. (4)


Las proteínas pueden determinarse mediante espectrofotometría visible (a 280 nm), haciéndolas reaccionar con reactivos que den de forma cuantitativa productos coloreados, utilizando la interpolación en una curva de calibrado, sin embargo es muchomás sensible utilizar reacciones de coloración.

Los procedimientos a utilizar difieren en función del método de coloración y de eliminación de interferencias, pudiendo citarse como los más utilizados los métodos de Bradford, Lowry, Lowry HEPES y Lowry TCA. (5)

Se emplea un colorante hidrofóbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de ácido fosfórico tienen un color pardo y que, al...