aislamiento y visualizacion de adn

42. Aislamiento y visualización de ácidos
nucleicos
Gabriel Dorado Pérez
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales,
Edificio Severo Ochoa, 14071-Córdoba

RESUMEN

La información necesaria para la construcción de los seres vivos se
encuentra almacenada en los ácidos nucleicos. Existen dos variedades
químicas de ácidos nucleicos: el DNA (ácidodesoxirribonucleico) y el
RNA (ácido ribonucleico). El cromosoma de las bacterias es de doble
cadena (dsDNA), circular y superenrollado. Su tamaño es de ~4.500 kilo
pares de bases (kpb). Estas células pueden contener también moléculas
de dsDNA relativamente pequeñas (~3 kpb), circulares y superenrolladas:
plásmidos. El RNA generalmente se encuentra en forma de cadena
sencilla, aunque sueleformar estructuras secundarias de doble hélice,
por autoapareamiento de regiones complementarias. Existen diversos
tipos de RNA ribosómico (rRNA), nombrados de acuerdo con su
coeficiente de sedimentación “Svedberg”, que es una medida de su
tamaño (peso), conformación y agregación. Así, los rRNA de procariontes
tienen tamaños de 23S (~2’5 kilobases; kb) y 16S (~1’5 kb). Una cantidad
menor de RNA—aunque muy importante para la célula—, es el RNA
mensajero (mRNA), que existe en una amplia variedad de tamaños: de
cientos a miles de bases (b). El mRNA representa la expresión de algunos
de los genes contenidos en el DNA cromosómico. El mRNA es leído en
los ribosomas con la ayuda del RNA transferente (tRNA; ~80 b),
traduciéndose a proteínas, que son las biomoléculas que sirven para
construirlos seres vivos. El objetivo de esta práctica es obtener una
preparación de todo el material genético de bacterias, que pueda ser
sometida a electroforesis.
Palabras clave: agarosa, bromuro de etidio, congelación, electroforesis, gel, luz
ultravioleta.
Abreviaturas empleadas (por orden alfabético de abreviatura). ADN: acido
desoxirribonucleico; BrEt: bromuro de etidio; LB: medio ricoLuria-Bertani; Na2–
EDTA: sal disódica del ácido etilén diamino tetra-acético; PM: peso molecular;
RNA: ácido ribonucleico; SDS: dodecil sulfato de sodio; TAE: solución
amortiguadora Tris-Acético-EDTA; TBE: solución amortiguadora Tris-BóricoEDTA; Tris base o Trizma base: Tris (hidroximetil) aminometano.

1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
La práctica se realizará en grupos de 24 alumnos, repartidos enocho
subgrupos de tres. Tendrá una duración aproximada de cuatro horas.

1

La información necesaria para la construcción de los seres vivos se
encuentra almacenada en los ácidos nucleicos. Su nombre deriva de su
carácter ácido y del hecho de que fueron descubiertos en el núcleo de las
células eucariontes.
Existen dos variedades químicas de ácidos nucleicos: el DNA (ácidodesoxirribonucleico) y el RNA (ácido ribonucleico). Generalmente, la
información genética se almacena en forma de cromosomas de DNA y se
expresa en forma de mRNA (RNA mensajero). Las bacterias son procariontes
(sin núcleo celular); por tanto, todos sus ácidos nucleicos se encuentran en el
citoplasma.
El cromosoma de las bacterias es de doble cadena (dsDNA), circular y
superenrollado. Su tamaño es de ~4.500kilo pares de bases (kpb). Estas
células pueden contener también moléculas de dsDNA relativamente pequeñas
(~3 kpb), circulares y superenrolladas: plásmidos. Éstos confieren diferentes
características a las células hospedadoras, como resistencia a antibióticos o
prototrofía para determinados nutrientes. Los plásmidos son además unas
herramientas muy valiosas en ingeniería genética y biologíamolecular.
El RNA generalmente se encuentra en forma de cadena sencilla, aunque
suele formar estructuras secundarias de doble hélice, por autoapareamiento de
regiones complementarias. La mayor parte del RNA forma parte (estructural y
funcional) de los ribosomas. Existen diversos tipos de RNA ribosómico (rRNA),
nombrados de acuerdo con su coeficiente de sedimentación “Svedberg”, que
es...