AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN
En general, las enzimas se encuentran formando parte de mezclas complejas, usualmente en el interior de células que además poseen cientos de otras enzimas. Pueden formarparte de agregados moleculares, complejos con otras enzimas, proteínas inertes, ácidos nucleicos, polisacáridos o lípidos. Para estudiar una en particular, se hace indispensable entonces un proceso depurificación.
 
A)    MÉTODOS DE ESTIMACIÓN - UNIDADES
El primer requerimiento para aislar una enzima es encontrar un ensayo cuantitativo de actividad mediante el cual pueda valorárselaconvenientemente. Para decidir si un paso de la purificación tiene sentido, es necesario medir la cantidad de enzima y la cantidad de impurezas antes y después de ese paso, y comparar los resultados de variosprocedimientos posibles. Sólo en términos cuantitativos se puede saber si se ha producido algún progreso. Puesto que una gran parte del tiempo empleado en el aislamiento de una enzima está dedicado adeterminar la actividad de las distintas fracciones, es deseable que ésta sea una operación rápida; es preferible sacrificar precisión por rapidez en las determinaciones.
 
La naturaleza del ensayodependerá del tipo de reacción que cataliza la enzima. A veces resultará conveniente la medición de la aparición de un producto y otras la medición de la desaparición de sustrato.
 
La actividad de una enzimadepende de condiciones tales como temperatura, pH, concentración; por lo tanto es necesario especificarlas y usar las mismas condiciones para comparar actividades. La elección del sustrato es muyimportante: debe ser barato, de fácil determinación, estable en ausencia de enzima y no sufrir reacciones laterales. Es necesario usarlo en concentración tal que sature la enzima, de modo que la velocidadsea independiente de la concentración de sustrato y proporcional a la cantidad de enzima.
 
En general, en los tejidos, una enzima puede estar presente en una proporción de 1/10 a 1/100 del... [continua]

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