Amilasa: Enzima Digestiva

UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL MAULE

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

ÁREA DE BIOLOGÍA Y QUÍMICA







AMILASA: ENZIMA DIGESTIVA





Informe Laboratorio Química Nº 3

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Junio, 2010







Introducción



Las enzimas son moléculas proteicas que catalizan reacciones, en estas reacciones lasenzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos.

Una enzima funciona mejor bajo ciertas condiciones específicas u óptimas que incluyen, temperatura, pH y la concentración del sustrato, un cambio en las condiciones óptimas, pueden alterar el desempeño de la enzima, desactivarla o destruirla.

Una de lasfunciones fundamentales del aparato digestivo es transformar los alimentos ingeridos en estructuras sencillas capaces de ser absorbidas a nivel intestinal. La digestión de carbohidratos ingeridos (como en este caso el almidón) comienza en la boca a través de la amilasa o ptialina, esta es una enzima hidrolasa que tiene la función de digerir glucógeno y almidón para formar azucares simples (glucosay maltosa).

Los objetivos fundamentales de este laboratorio son

o Identificar diferentes factores que pueden afectarla actividad enzimática.

o Conocer la función de la amilasa salival en el proceso de digestión de los carbohidratos



















Materiales y Métodos

1.1.- Materiales y reactivos


a) Materiales

• Baño de agua

• 1gradilla

• Pipetas de 5 – 10 mL

• Platos petri

• 18 tubos de ensayo

• Varillas de agitación

• 3 vasos de precipitado 50 o 100 mL

• Cloroformo





b) Reactivos

• Agua destilada

• Fenol

• HgCl2 1%

• NaCl 0.9%

• NaF

• Reactivo de Benedict

• Saliva humana

• Solución buffers

• Solución dealmidón al 1 y 2%

• Yodo


1.2.- Métodos

1.2.1.- obtención de la amilasa salival

a) Un voluntario del grupo deberá juntar 4 mL de saliva en un vaso de precipitados.

b) Diluir 2 mL d saliva, obtenidos anteriormente, en 18 mL de agua destilada. Esto equivale a la solución de saliva 1:9

c) Diluir los otros 2 mL restantes de saliva en 8 mL de agua destilada. Esto equivale a la soluciónde saliva 2:8

1.2.2.- Experimentos

Experimento N°1: Efecto de la temperatura

a) Verter a 4 tubos de ensayo 1 mL de la solución de saliva 1:9.

b) Incubar cada tubo a las siguientes temperaturas: Tubo N°1: 0C,Tubo N°2: temperatura ambiente, Tubo N°3: 37C y Tubo N°4: 100C

c) Luego a cada tubo de ensayo agregue 5 mL de solución de almidón al 1%

d) Agregar 3 gotas de yodo y observarcada 3 minutos hasta los 9 minutos.

e) Finalmente realizar la prueba de benedict a cada tubo de ensayo agregando 3 gotas de este reactivo.

Experimento N°2: Efecto del pH

a) Verter a 7 tubos de ensayo 1.5 mL de solución de saliva 1:9.

b) A cada tubo agregar 3 mL de solución buffer correspondiente a :Tubo N°1: solución buffer pH 2.5,tubo N°2: solución buffer pH 5.4, tubo N°3: soluciónbuffer pH 6.0, tubo N°4: solución buffer 6.8, tubo N°5: solución buffer 7.4, tubo N°6: solución buffer 8.0 y tubo N°7: solución buffer pH 10.0

c) Incubar los 7 tubos durante 5 minutos a una temperatura de 37C

d) Agregar a cada tubo 5 mL de almidón al 2%.

e) Agregar a cada tubo 3 gotas de yodo y observar cada 3 minutos hasta los 9 minutos.

f) Finalmente realiza la prueba de Benedict a cadatubo de ensayo agregando 3 gotas de este reactivo.

Experimento N°3: Inhibición e inducción enzimática

a) Agregar a 6 tubos de ensayo 1 mL de solución de saliva 2:8.

b) Agregar a cada tubo 1 mL de las siguientes sustancias: tubo N°1: cloroformo, tubo N°2: Hg2 al 1%, tubo N°3: fenol puro, tubo N°4: NaF, tubo N°5: agua destilada, tubo N°6: NaCl al 0.9%

c) Incubar los tubos durante 5...