Amilasa

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OBJETIVOS:

Estudiar la actividad enzimática de la a-amilasa salival y caracterizar dicha actividad para conocer las condiciones óptimas de funcionamiento, la naturaleza química de la enzima y lasformas en que puede ser activada o inhibida.

INTRODUCCIÓN:

La a-amilasa es una enzima que degrada almidón. El almidón es un polisacárido de glucosa que se encuentra como fuente de reserva enlas plantas y está compuesto por dos tipos diferentes de moléculas: la amilosa y la amilopectina.
La amilosa está formada por largas cadenas de glucosa, donde el C1 de una se une al C4 de lasiguiente, formando cadenas lineales y con estructura helicoidal. La amilopectina está formada por largas cadenas de glucosa unidas (C1 con C4 al igual que la amilosa) pero con múltiples ramificaciones dondeestá unido el C1 con el C6.
La a-amilasa rompe uniones entre los carbonos C1 y C4 de dos glucosas. Por lo tanto, usando almidón como sustrato, libera como productos dextrinas lineales y ramificadas.Las dextrinas son oligosacáridos compuestos, en este caso, por unas pocas unidades de glucosa.
Podemos conocer la actividad de una enzima midiendo la aparición de producto, o bien, la desaparición desustrato. De esta forma se pueden hacer diferentes ensayos ya sea utilizando métodos espectrofotométricos (midiendo la absorbancia de luz de una determinada longitud de onda) o marcando sustratosradiactivamente. Pero debido a que en este TP vamos a usar un test colorimétrico, seguiremos la reacción detectando la desaparición de sustrato.

DESARROLLO:

1) Para poder aplicar el testcolorimétrico, una voluntaria del grupo recolectó 2-3 ml de saliva en un vaso de precipitados pequeño y medimos el pH con papel indicador, comparando con una curva de color. El resultado fue un pH próximo a 7.2) Preparación de la enzima: hicimos una dilución 1/10 con agua destilada, llegando a un volumen final de 5 ml, y mezclamos por inversión suave.
3) Preparamos nuestra solución de trabajo...
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