Analisis De Rutina

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Los análisis de rutina, se utilizan para determinar la existencia y número de microorganismos en una muestra de alimentos. Sin embargo ninguno de los métodos utilizados habitualmente permite determinar el número exacto de microorganismos que existe en un determinado alimento. Objetivos: 1. 2.3. Determinar la cantidad de microorganismos viables en una muestra problema por el método estándar de recuento en placa. Reconocer la importancia de la técnica estándar de recuento en placa en microbiología básica y aplicada. Adquirir destrezas en el desarrollo de la Técnica estándar de recuento en placa.

Fundamentos: Para evaluar el crecimiento microbiano es necesario realizar medidascuantitativas de la biomasa microbiana, del número de células por unidad de volumen, el peso de las mismas o algunas de sus actividades metabólicas. El número total de microorganismos se puede determinar por recuento microscópico directo de los microorganismos, ya sea en frotis coloreado o en cámaras de recuento, por filtración de membrana, coloración y conteo al microscopio, por conteo electrónico(citometria de flujo). En algunas ocasiones es necesario conocer la cantidad de células microbianas que están viables, para este propósito se usan técnicas como: recuento de colonias en placa (ya sea en profundidad o en superficie), filtración por membrana e incubación de esta sobre un medio de cultivo sólido, en medio líquido por el método del Número más probable NMP. La masa celular se puededeterminar directamente por el peso seco de las células o de manera indirecta por el análisis de algún elemento como C, N,S, etc. La actividad celular relaciona cierta actividad al tamaño de una población, se estudia la concentración de sustancias como: enzimas, CO2 consumo de O2, ATP o algún metabolito. El recuento de microorganismos viables en placa, permite la determinación de los microorganismospresentes en una muestra en base a su desarrollo en medio de cultivo en placas, formando colonias. Por lo tanto sólo se determinan las células microbianas viables en las condiciones de trabajo. Las colonias se consideran originadas a partir de una célula, pero a veces la metodología conduce a que puedan surgir de un grupo de células, por lo que se utiliza el término Unidades Formadoras de Colonias(ufc). Además para que todas las células presentes en una caja tengan una adecuada disponibilidad de nutrientes, y que los errores del método sean menores, se establece que las condiciones óptimas de conteo se dan cuando se desarrollan entre 30 y 300 colonias por placa o menos según el caso. La técnica estándar de recuento en placa es la metodología más usada en el laboratorio de microbiología dealimentos, por esta razón es de vital importancia adquirir destrezas en su aplicación e interpretar adecuadamente los resultados de un recuento microbiológico.

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE SENA GUIA PARA LABORATORIO ANÁLISIS DE RUTINA Medios de cultivo 1 Fiola de 80mL de SPC fundido 1 Fiola de 80mL de Sabouraud fundido 1 Fiola de 80mL de VRBA fundido 1 caja de SPC de 20ml 1 caja de Sabouraudde 20ml 1 frasco con 90ml de peptona al 0.1% 4 tubos tapa rosca con 9ml de peptona al 0.1% Materiales 12 cajas de petri estériles 1 Pipeta de 10ml estériles 5 pipetas de 1ml estériles 1 Vidrio de reloj estéril 1 espátula o baja lenguas 1 Pipeteador de 10ml 1 Bolsa estéril para Stomacher 1 Gradilla Muestra alimento 10 a 100gr PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL i. 1. 2. PREPARACIÓN DEL LUGAR DE TRABAJO

43. 4. ii.

Limpie con detergente o jabón y desinfecte con alcohol el área de trabajo Ponga una hoja de papel en el área desinfectada, sobre la cual debe ubicarse el mechero, la gradilla y los demás implementos de trabajo. La hoja debe descartarse al terminar el trabajo de laboratorio. Prenda el mechero antes de iniciar el trabajo práctico. (La llama del mechero debe ser de color azul)...