Analisis microbiológico de aguas

TEMA 8:
MICROBIOLOGÍA
ANÁLISIS MICROBIOLOGICO DE AGUAS

1. INTRODUCCIÓN AL ANÁLISI MICROBIOLÓGICO
- MATERIAL ESPECIAL
- ESTERELIZACIÓN
2. TOMA DE MUESTRAS
3. CULTIVO DE MICROOGANISMOS
- MEDIOS DE CULTIVO
- TÉCNICAS DE SIEMBRA
- TÉCNICAS DE INCUBACIÓN
4. MICROSCOPÍA
- MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO BINOCULAR
- TÉCNICAS DE TINCIÓN
- TÉCNICAS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS
- TÉCNICASDE IDENTEFICICACIÓN
5. PROTOCOLOS NORMALIZADOS PARA EL ANÁLISIS MICRBIOLÓGICO DE AGUAS

1. INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
Al trabajar con microorganismos que pueden ser potencialmente peligrosos hay que extremar las medidas de seguridad. (Ver última página)
Símbolo de biopeligrosidad:
Definición de biopeligrosidad: cualidad potencial de algunos agentes biológicos para desarrollarenfermedades en humanos, animales o plantas.
- MATERIAL ESPECIAL
Se trabaja con tres tipos de material:
• Vidrio: borosilicatado. Ventajas: fácil limpieza, gran transparencia, alta resistencia térmica con bajo coeficiente de dilatación, resistencias químicas, reciclable.
• Plástico: puede ser:
o Reutilizable: no es adecuado para medir volúmenes exactos
o Desechable: en bolsaspreesterilizadas (óxido de etileno), placas petri, pipetas pasteur, asas de siembra, embudos de filtración, frascos para la toma de muestras.
* Acero: gran resistencia mecánica y térmica, es reutilizable, fácilmente esterilizable (calor seco, estufa) y calor húmedo (autoclave)

- Material para esterilizar:
 Mechero Bunsen: absolutamente necesario en microbiología. Favorece una zona estéril a su alrededor.Esteriliza el asa de siembra y demás material por flameado.
 Horno Pasteur (gas) o Poupinel (eléctrico): esterilizan por aire caliente. Calor seco a 170-180ºC durante una hora. Material para el que sirve: vidrio, porcelana o metal. Se envuelve el material en papel Kraft y se rotula.
 Autoclave: esterilización por calor húmedo. Ciclo más habitual: 121ºC a 2 atmósferas durante 20 minutos (15-45minutos)
Normas de uso:
 Asegurarse de que el agua destilada es transparente y cubre la resistencia eléctrica y mantener el nivel que indica el fabricante.
 Introducir el material a esterilizar en la cesta metálica.
 Introducir la cesta en el autoclave (las botellas deben estar poco abiertas para esterilizar. Rosca no hasta el final) Hay que poner bolsas dobles cuando se introducen placasy recipientes con agar.
 Cerrar la tapa.
 Cerrar las llaves de drenaje y vapor.
 Ajustar el tiempo de esterilización.
 Se conecta a la red eléctrica y se acciona el encendido.
 Esperar el ciclo.
 Comprobar antes de abrir que la presión es igual a la atmosférica.
 Abrir con precaución la tapa.
 Sacar la cesta con el material y atemperarlo (guantes)
 Bolsas de autoclave: se usanpara material desechable que ha estado en contacto con productos biológicos. Se autoclavan abiertas a 121ºC a 1 atmósfera de sobrepresión y durante 30 minutos. Símbolo de riesgos biológico.
 Filtros estériles: son filtros cuyo diámetro de poro retienen bacterias de 0,45m. Se usan para sustancias termolábiles.
- Material para medios de cultivo:
 Placas petri: recipientes cilíndricos con caja ytapa. Son de vidrio o plástico (más usual) se usan para cultivos sólidos. Medidas habituales: de 90mm y 55mm de diámetro. Se abren el tiempo mínimo y cerca de mechero. Una vez sembradas es aconsejable manipularlas y almacenarlas con la tapa hacia abajo (invertidas) para impedir la caída de contaminantes.
 Tubos de ensayo: para cultivos líquidos, semilíquidos y sólidos. También para hacerreacciones. Dimensiones: 200x20mm y 180x18mm
 Asepsia: se flameará siempre la boca del tubo sin tapón antes y después de manipularlos. Se sujetan en gradillas de acero inoxidable.
 Tapones: metálicos (se flamearán), algodón graso (un solo uso), celulosa, de rosca, herméticos, papel de aluminio: para meter erlenmeyeres al autoclave.
- Material de siembra:
 Asa metálica: tiene dos zonas: manga de...