Animales transgenicos

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AISLAMIENTO, CULTIVO Y CARACTERIZACIÓN DE LÍNEAS CELULARES EMBRIONARIAS DE BLASTOCITOS BOVINAS.

La producción in vitro de embriones bovinos ha adquirido importancia para ser alternativa o encombinación importancia para ser usada como alternativa o en combinación con programas de ovulación múltiple y transferencia de embriones debido a sus grandes ventajas y flexibilidad.Las células troncalesembrionarias(ES) derivan de la masa celular interna (MCI) del embrión preimplantacional y se caracterizan por capacidad de autorrenovarse y, ante determinadas señales,al especializarse para realizaruna función concreta. El estado de indiferenciación e inmortalidad de las células pluripotentes facilita la modificación génica de estas células ya que son capaces de formar todas las células de lostejidos embrionarios.

El objetivo principal es el aislamiento, cultivo y caracterización de líneas embrionarias producidas a partir del aislamiento de masa celular interna (MCI) de blastocitobovino.Para lograr estos se realizaron varias etapas del aislamiento y el cultivo de MCI de embriones producidos in vitro y la caracterización de las colonias celulares resultantes. Además para laidentificación del fenotipo de las células ES se ha estudió su morfología y la expresión de marcadores específicos, así como el mantenimiento de estos rasgos a lo largo del cultivo y de los ciclos decongelación-descongelación.

Para la producción in vitro los ovocitos utilizados se recuperaron ovarios procedentes del matadero, y se seleccionaron. Se fertilizaron in vitro con espermatozoides motilesobtenidos mediante a partir de semen congelado y descongelado. Para el aislamiento de MCI se seleccionaron blastocistos expandidos y eclosionados de días 7, 8 y 9 de cultivo con excelente calidadmorfológica.Tras un lavado la MCI fue separada del trofectodermo por un procedimiento de inmunocirugía con algunas modificaciones.

El cultivo se realizó sobre una monocapa de fibroblastos embrionarios...
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