antibiogramas

PRACTICA N° 6

ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA IN VITRO: ANTIBIOGRAMA

OBJETIVOS
Entender el fundamento del antibiograma, el modo que se realiza y las principales fuentes de error.
Conocer los principales métodos de susceptibilidad a un antimicrobiano.
Evaluar la sensibilidad o resistencia a diversos antibióticos de una bacteria de crecimiento rápido aislada en prácticas anteriores. El métodoutilizado es el de difusión en agar o de Kirby-Bauer
INTRODUCCIÓN
La actividad de los antimicrobianos (antibióticos y quimioterápicos) debe ser evaluada “in vitro” para obtener la información que permita decir si un microorganismo es susceptible o resistente a determinado producto.
Los antimicrobianos actúan produciendo toxicidad selectiva; no actúan directamente sobre el huésped, sino que secombinan químicamente con determinados sistemas de los microorganismos, enfocando así la acción sobre los microorganismos más que sobre el huésped.
La determinación de la mínima concentración inhibitoria (MIC) nos proporciona la dosis mínima necesaria del quimioterápico para impedir el desarrollo bacteriano, lo que permite hacer estudios de uso clínico y detectar mutantes resistentes.
Dos son losprocedimientos empleados para conocer ésta información, el método del tubo dilución y el del disco difusión en agar , a éste último se le denomina “antibiograma”.

Acción de los Antibióticos
La actividad antimicrobiana in vitro determina: (a) la potencia de un agente antibacteriano en solución; (b) su concentración en los líquidos del cuerpo o en los tejidos; y (c) la sensibilidad de unmicroorganismo dado a concentraciones conocidas del medicamento.
Inhibición de síntesis de pared celular: por ejm. Penicilina, Cefalosporina, Bacitracina, Vancomicina, Novobiocina.
Alteración de permeabilidad de membrana celular: Anfotericina B, Colistina, Nistatina, Polimixina.
Inhibición de síntesis proteica: Aminoglucósidos (Kanamicina, Amikacina, Estreptomicina), Tetraciclinas, Cloranfenicol,Macrólidos (Eritromicina, Lincomicinas (Lincomicina, Clindamicina)
Inhibición de síntesis de ácidos nucleicos: Acido Nalidixico, Novobiocina, Sulfonamidas, Trimetropin, Rifampicina.

Medición de la actividad antimicrobiana
Esta se determina mediante los métodos de dilución o difusión, utilizando un microorganismo standard y una cantidad conocida del antimicrobiano. Para ello se utiliza las pruebasde dilución en tubos y el método de difusión.

Prueba de dilución
En éste ensayo se incorporan cantidades conocidas de antimicrobianos en medios líquidos; se inoculan después con las bacterias en prueba y se incuban. El punto final se toma cuando la cantidad de sustancias antimicrobiana es capaz de inhibir el crecimiento o de matar a las bacterias en prueba.

MÉTODO DE DIFUSIÓN

Preparacióndel inoculo
La técnica de antibiograma sólo es aplicable a especies bacterianas en cultivo puro. Por ello, previamente se procederá, si es preciso, a hacer un aislamiento en placa.
Cultivar la bacteria aislada en un tubo de medio líquido apropiado (caldo nutritivo, infusión cerebro-corazón) o preparar una suspensión directa a partir del cultivo en placa usando el siguiente método: Tomar de unacolonia aislada con el asa y resuspender en el tubo de solución salina frotando en la pared del tubo. Homogeneizar bien y ajustar la densidad óptica con un patrón de turbidez n° 0.5 de McFarland (0,5 ml de cloruro de bario 0,048 M y 99,5 ml de ácido sulfúrico 0,36 M). Esto equivale aproximadamente a una densidad de 108 células/ml. Diluir si es necesario la suspensión o añadir más inóculo.Impregnar una torunda con la suspensión del inóculo; escurrirla contra la pared del tubo y sembrar con ella toda la superficie de la placa, mediante estrías cruzadas en varias direcciones. Antes de 15 minutos deben colocarse los discos de antibióticos. Con pinzas flameadas y frías (o con un aplicador automático) se disponen los discos sobre las placas, de forma que disten unos 15 mm del borde de la...