Bacterias gram positivas y negativas

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OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es de realizar la tinción de bacterias Gram con el propósito de poder observar las dos diferentes bacterias (Gram positivas y Gram negativas), y a su vez realizar los diferentes tipos de tinción más frecuentes.

INTRODUCCIÓN

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeños para observarse a simple vista como es el caso de: protozoos,algas, hongos, bacterias y virus.

Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, estructura, tamaño, composición entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico para facilitar notablemente la observación; principalmente en las bacterias, se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales también la observación de ciertasestructuras celulares. Desarrollamos los métodos de tinción y damos a conocer un análisis de los resultados obtenidos en la práctica.

TINCIÓN DE GRAM

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tantopara poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.

Con violeta cristal, violeta de genciana, azul de metileno o en todo caso tinta china utilizando unacantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 °C.
 Enjuague
Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NOdebe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un milímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina portaobjetos en posición inclinada hacia abajo... La solución de cristal violeta, se recomienda sea al 1% .

MATERIA Y REACTIVOS|MATERIAL |REACTIVOS |EQUIPO |
|Asa bacteriológica |Solución de azul de metileno |Microscopio |
|Punte de tinción |Solución de cristal violeta |mechero|
|7 portaobjetos |Nigrosina o tinta china | |
|6 cubreobjetos |Lugol | |
|1 vaso de precipitado |Etanol al 95% ||
|1 pipeta de 5 ml |Safranina | |
|1 tubo de ensayo con tapón de rosca |Agua destilada | |
|Pizeta |Solución de alcohol-acetona ||

DESARROLLO

Fijar un frotis

• Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.
• Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.
• Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la...
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