Bilirrubinas

PRÁCTICA V. BILIRRUBINAS |
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL |
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ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Departamento de Bioquímica |
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Ana Fabiola Sánchez Cortés |
04/04/2011 |
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PRÁCTICA V. BILIRRUBINAS
Preliminares
La bilirrubina es un tetrapirrol derivado de la degradación de los glóbulos rojos envejecidos, normalmente se encuentran en bajas concentraciones sanguíneas. EnLa bilis está presente como acidilglucurónido, un conjugado hidrosoluble. En la sangre está estrechamente unida a la albúmina del plasma. La reducción dela bilirrubina en el intestino da cropobilinógeno, que a su vez es oxidado a un pigmento marrón: la coprobilina.
La bilirrubina sérica se determina mediante el acoplamiento con ácido sulfanílico diazotado, para formar azobilirrubina, que sedetermina por análisis colorimétrico. La prueba de bilirrubina directa o conjugada se lleva a cabo en un medio acuoso; el análisis de la bilirrubina indirecta o libre se efectúa en metanol o en una solución de cafeína-benzoato de sodio. Los valores normales en el suero son: bilirrubina directa: hasta 0.3 mg/dl; bilirrubina total hasta 1.5 mg/dl.
La ictericia clínica es el color amarillento de lostejidos asociado con la hiperbilirruminemia; en la enfermedad hemolítica del recién nacido debida a incompatibilidad de los sistemas Rh y ABO principalmente, aumenta el nivel sérico de la bilirrubina indirecta, mientras que la hepatitis aguda da por resultado aumentos de la bilirrubina directa.

Objetivo
Determinar la bilirrubina sérica directa (conjugada) y la bilirrubina total y calcular labilirrubina indirecta.
Fundamento del método de Jendrassik y Grof
La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide fotocolorimétricamente a 530 nm
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presenciade un desarrollador acuoso que posibilite su reacción. De forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción.
Resultados del equipo:
| Bilirrubina Total | Bilirrubina Directa |
Absorbencia | 0.018 | 0.007 |
Concentración(mg/dl) | 0.26 | 0.102 |

Cálculos:
Abs St / [St] =Factor (F); que es igual a 14.53
F (Absorbancia problema) = [mg/dl]
14.53 (0.018) = 0.26 ….Bilirrubina Total
14.53 (0.007) = 0.102…. Bilirrubina Directa

Resultados de la Sección:
Equipo | Bilirrubina Total (mg/dl) | Bilirrubina Directa (mg/dl) |
1 | 0.38 | 0.17 |
2 | 0.29 | 0.11 |
3 | 0.58 | 0.43 |
4 | 0.26 | 0.102 |
Promedio (X) | 0.37 | 0.203 |
Coeficiente de Variación | 39.2 %| 75.8% |

Coeficiente de variación C.V. = SDX*100
Desviación estándar S.D. = √(S)
Varianza
Ejemplo para bilirrubina total:
S2 = 0.38-0.372+ 0.29-0.372+0.58-0.372+ 0.26-0.3724-1 = 0.0209
S.D. = √0.0209= 0.145
C.V. = 0.1450.37*100 = 39.2 %
Discusión
En la determinación de este metabolito, se debe tener gran precaución en el momento en que colocamos el diazorreactivo, ya queeste va a desencadenar la reacción con la bilirrubina y debe ser hecha la lectura en el momento preciso (5 min) que la técnica lo requiere, además, la manipulación de la muestra debe ser cuidadosamente ya que la bilirrubina es fotosensible y una exagerada exposición a la luz podría alterar los resultados finales al realizar la determinación. Igualmente, la formación de burbujas de aire o laagitación pueden disminuir la concentración de bilirrubina en la muestra.
De acuerdo a los resultados obtenidos, la mayoría se localizan dentro de los valores de referencia, con excepción del valor obtenido por el equipo 3 en la determinación de bilirrubina directa; si esto lo aplicamos a la clínica, podría tratarse de un paciente que sufriera alguna patología de tipo obstructivo del conducto biliar...