Bioenergetica

Electroforesis (por peso moleculares)
* Se rompen los enlaces bisulfuro con agentes reductores
* se carga a la proteína negativamente con SDS que es un detergente
* se colocapoliacrilamida
* búfer es por lo regulas de 7 y es de fosfatos para que corra la corriente eléctrica
* El gel concentrador es donde se coloca las proteínas es de poro más abierto
* Separación deproteínas por peso moléculas de proteína se desnaturaliza reduciendo los enlaces bisulfuro
Secuenciación de proteínas
Cianuro de ciangeno

Es importante para conocer la estructura primeria quees la secuencia de a.a.
1. El reactivo de Edman.

El reactivo de Edman o fenilisotiocianato, se utiliza en condiciones ligeramente básicas, para marcar específicamente el grupo amino terminal deuna proteína. El derivado feniltioidantoina (comúnmente conocido como PTH), hace inestable el segmento N-terminal de manera que puede ser selectivamente hidrolizado. Sin romper los demás enlacespeptídicos. El reactivo de Edman puede ser aplicado repetidamente al péptido resultante del tratamiento anterior. Este proceso ha sido automatizado y se lleva a cabo por un secuenciador que puededeterminar la secuencia de alrededor de 100 aminoácidos en una proteína desde su N-terminal
* Este reactivo hidroliza al primer a.a. hidrolizándolo y lo arranca de la proteína
* El método se Sanger2-4 dinitrofluorobenceno
* Tripsina rompe entre Arg y Gly
* Carboxipeptidasa rompe el carboxilo terminal
* Fenilisotiocianato rompen el a.a. inicial

2. Ruptura del polipéptido enfragmentos pequeños.

Muchas proteínas poseen una secuencia primaria mayor a 100 aminoácidos, por tanto, estas moléculas no pueden ser secuenciadas directamente desde el N-terminal hasta el C-terminalpor el secuenciador. Por lo tanto deben ser cortadas en sitios específicos y así los fragmentos resultantes pueden ser secuenciados independientemente. Al utilizar por separado, más de un agente para...