Biologia molecular

DERMATOLOGÍA PERUANA - VOL. 9, SUPLEMENTO 1, DICIEMBRE - 1999 |
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TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR EN El DIAGNÓSTICO EN DERMATOLOGÍA
*GARCÍA-ROJO M1, MORILLO-CASTRO A 2
1.Servicio de Anatomía Patológica. Complejo Hospitalario de Ciudad Real. Av. Pío XII s/n 13002 Ciudad Real. España. e mail: marcial@teleiine.es
2. Centro de Salud III de Puertollano. Puertollano. Ciudad Real. España.e-mail: amorillo@teleline.es

RESUMEN
La aplicación de las técnicas de biología molecular a las enfermedades de la piel ha permitido conocer los mecanismos íntimos de muchas entidades, facilitando su diagnóstico e incluso su tratamiento. Estas técnicas permiten extraer y analizar el ADN o ARN de sangre periférica o de biopsias de piel, tanto en fresco o en congelación como en los tejidos incluidosen parafina. Las técnicas de hibridación tras la extracción de ácidos nucleicos han evolucionado desde las más sencillas como Southern blot o Dot blot hasta otras más sofisticadas como la hibridación genómica comparada. Sin duda, uno de los campos con más futuro es la aplicación de técnicas de hibridación a las secciones histológicas (hibridación in situ), incluyendo su variación fluorescente parael análisis de cromosomas (FISH, hibridación in situ con fluorescencia). Hoy en día; a mayoría de las técnicas de análisis de ADN se basan en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que puede ser aplicada a un gran número de procesos nosológicos, y destacar sobre las anteriores por su sensibilidad, aunque a costa de una mayor complejidad tecnológica para impedir falsos positivos. De todaslas variantes de PCR, la más destacable es la PCR-transcripción inversa (RTPCR), que permite el estudio del ARNm en las células y por tanto es una herramienta imprescindible para conocer la patogenia en tumores, enfermedades infecciosas (como la detección de micobacterias en biopsias de piel de sarcoidosis), entre otras aplicaciones.
Los métodos utilizados para la detección de mutaciones en elgenoma se clasifican según su capacidad para ser utilizados como métodos de cribado como el polimorfismo estructural de cadena simple (SSCP) o la electroforesis en gel desnaturalizante (DDGE), frente a aquellos que detectan mutaciones conocidas, como la amplificación especifica de alelos. Basándose en la estructura especial de algunas regiones del genoma humano, se aplican también técnicas basadas enlos llamados microsatélites o telomerasas.
En los próximos años, las técnicas moleculares más eficaces seleccionadas por la experiencia se verán facilitadas por la automatización de cada uno de sus pasos, permitiendo incluso un diagnóstico inmediato en la detección de ciertas mutaciones. Sin embargo, la interpretación de estos datos moleculares es más complicada y debe ser valorada justo con larealidad clinicopatológica de cada paciente.
Palabras clave: Biología molecular, técnicas de diagnóstico
 
SUMMARY
The application of the molecular biology to the skin diseases permit us to know the intimal mechanism of several entities, facilitating its diagnosis and even its treatment. These technics permit us to obtain and analyse the DNA or RNAfrom peripheral blood or skin biopsy, in freshor frozen and in paraffin tissue.
The hybridization technics after the extraction of nucleic acids had evolved from since the single one like Southern blot o Dot blot to others more sophisticated like comparative genomic hybridization. Undoubtedly one of the fields with more future is the application of hybridizations technics to the histologics sections (hybridization in situ) including itsfluorescent variation for the chromosome analysis (Fish, hybridization in situ with fluorescence).
At present most of the technics from DNA analysis are bred on the chain reaction of the polymerase (PCR) which can be applicated to great number of nosologic processes and has the advantage upon the precedents because its sensitivity, although it is more complicated to avoid false positives. From all...