Bioquimica

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=PRUEBAS BIOQUIMICAS=
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria alcrecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
Las pruebas bioquímicas no determinan cultivos mixtos son única y exclusivamente para microorganismos puros.
Fundamentos de las Pruebas Bioquímicas Comúnmente Utilizadas en un Laboratorio de Microbiología.
* Prueba"Catalasa"
La enzima descompone el peróxido de hidrógeno H2O2
Método: Añadir una gota de H2O2 a un cultivo denso y buscar burbujas (O2)
Utilización más frecuente Bacillus (+) de Clostridium (-) estreptococcus (-) de micrococcus (-) staphilococcus (+)
* Prueba de “Citrato”
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono ycompuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio. Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes géneros: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.
Secultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido), generará una fuertebasificación del medio que será aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.
* Prueba de Fenilalanina Diseminasa
Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el aminoácido fenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática de fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante. Esta actividad enzimática es característica de todaslas especies del género Proteus y del grupo Providencia por lo que se usa para separar ambos géneros de otras enterobacterias
Se cultiva el microorganismo en agar fenilalanina sembrando la superficie del slant con abundante inóculo e incubando durante 12-16 horas. Seguidamente se añade 0,2ml de una solución de cloruro férrico al 10% de manera que inunde todo el crecimiento. La presencia de ácidofenilpirúvico (prueba positiva) se manifiesta por la aparición de un color característico verde oscuro o verde-azulado.

* Prueba de Indol
Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante el enzima triptofanasa.
Para la realización de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48horas en un caldo de triptona con NaCl al 0,5% (la triptona presenta abundante triptófano). Para la posterior detección del indol se usa el reactivo de Kovacs que se puede preparar con los siguientes ingredientes:
* Alcohol amílico o isoamílico (puede sustituirse por alc.butílico)........150ml
* p-dimetilamino-benzaldehído..........................................................10g* HCl (concentrado).........................................................................50ml
Se disuelve primero el aldehído en el alcohol y después se agrega lentamente a esta mezcla el ácido. Para el control de calidad del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las más convenientes son Escherichia coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-).
Si la bacteria posee...
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