Bioquimica

Departamento de Ciencias Básicas
Bioquímica General

ENZIMOLOGÍA I

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INTRODUCCIÓN

Las enzimas corresponden en su mayoría y son conformadas por proteínas, son destacadas por ser las proteínas más notables y altamente especializadas. Corresponden a catalizadores de las reacciones de los sistemasbiologicos1. Una de las características principales de estas proteínas es que son los catalizadores mas eficientes que se conocen, las reacciones ocurren a una velocidad alrededor de un millón de veces más alta que una reacción normal, estas confieren la particularidad de tener una especificidad de acción. Por último, las acciones de muchas enzimas son reguladas; es decir, pueden cambiaralternativamente de un estado de baja actividad a otro de gran actividad.2

La función de las Enzimas corresponde a un incremento de la velocidad de una reacción, en donde es esencial un pH óptimo o neutro, temperatura suave y ambientes acuosos presentes en el interior de las células.3

Más de la mitad de los carbohidratos ingeridos por el hombre son almidón. Tanto la amilopectina como la amilosa sehidrolizan rápidamente por la α-amilasa, una enzima que secretan las glándulas salivales y el páncreas, dado que el almidón presenta dos estructuras: el enlace α 1-4 (amilasa) y α1-4 y α 1-6 (amilopectina), y que tiene la particularidad de ser reconocido por el elemento químico “Yodo” presentando una coloración azul. El almidón cuando se hidroliza libera amilosa y amilopectina lo cual se puedeidentificar por la perdida de la coloración azul dada por el yodo sometiéndola a temperaturas y pH diferentes.

OBJETIVOS
* Familiarizarse con los procedimientos de laboratorio para manipular muestras biológicas.
* Conocer algunos procedimientos para determinar la actividad de una enzima en muestras biológicas.
* Comprobar el efecto que tiene en la actividad de una enzima lasvariaciones de pH y temperatura.

MATERIALES Y MÉTODOS

Procedimiento A: Efecto de la temperatura sobre la hidrólisis enzimática del
almidón.

Se preparó una solución enzimática de amilasa salival haciendo un lavado bucal con una solución de NaCl (0.9% p/v). Luego se realizo un filtrado con algodón a la solución en un embudo. A cuatro de cinto tubos de ensayos se le agrego preparaciónenzimática (2 mL) y distintas volúmenes de NaCl 0.9 % p/v, tampón fosfato (pH 7.0), Almidón (1% p/v) como se muestra en tabla y se incubo a distintas temperaturas los cinto tubos. Se puso el Tubo 1 en un recipiente con hielo, el tubo 2 a 100° C en el baño termorregulador (Recisión Water Bath NB-301 Handylabsystem N-Biotek) al igual que los tubos 4 y 5 a 37° C y el tubo 3 se puso a temperaturaambiente. Después de los 15 minutos se nivela la temperatura de los tubos con agua a temperatura ambiente, finalmente se le agregan 2 gotas de lugol a cada tubo, se homogeniza y anotan los resultados obtenidos.

Tubos | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
NaCl 0.9% p/v | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
Tampón fosfato pH 7.0 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
Almidón 1% p/v | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |Preparación enzimática | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | - |
Incubar a: (15 minutos) | 0°C | 100°C | 25°C | 37°C | 37°C |

Procedimiento B: Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival.

Con la misma preparación enzimática del procedimiento anterior se preparan 3 de 4 tubos de ensayos que se les agrego distintos volúmenes de NaCl (0.9% p/v), tampón fosfato (1ml) y almidón (1% p/v)como se indica en la tabla, luego se dejo incubando a temperatura ambiente por 15 minutos y finalmente se le agrego una gota de lugol.

Tubos | 1 | 2 | 3 | 4 |
NaCl 0.9% p/v | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
Tampón fosfato (1ml) | pH5 | pH7 | pH9 | pH9 |
Almidón 1% p/v | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
Preparación enzimática | 2ml | 2ml | 2ml | - |

RESULTADOS
Procedimiento A: Efecto de...