Bioquimica

La microscopía confocal
Un microscopio confocal crea imágenes nítidas de una muestra que de otra manera se vean borrosos cuando se ve con un microscopio convencional. Esto se logra mediante la exclusión de la mayor parte de la luz procedente de la muestra que no es desde el plano focal de microscopios. La imagen tiene menos neblina y mejor contraste que la de un microscopio convencional yrepresenta un que la sección transversal de la muestra. Así, además de permitir una mejor observación de los detalles finos, es posible construir reconstrucciones theree-dimensionales (3D) de un volumen de la muestra mediante el ensamblaje de una serie de finas láminas tomadas a lo largo del eje vertical.

Fondo
La microscopía confocal fue iniciado por Marvin Minsky en 1995, cuando él era uncompañero de tercer año en la universidad de Harvard. invención Minsky llevaría a cabo una construcción de la imagen punto por punto, centrándose en un punto de vista de forma secuencial a través de una muestra y la recogida de algunos de los rayos que retornan. Al iluminar un único punto en el momento Minsky evitarse la mayor parte de la luz no deseada dispersa que oscurece una imagen cuando la muestracompleta se ilumina al mismo tiempo. Además, la luz que vuelve de la muestra pasaría a través de un diafragma de segunda que rechazan los rayos que no se forman directamente en el punto focal. los restantes rayos de luz deseables entonces por recogida por un fotomultiplicador y la imagen reconstruida gradualmente utilizando una pantalla de larga persistencia. Para generar la imagen, Minsky escaneadola muestra moviendo la etapa en lugar de los rayos de luz. Esto era para evitar el reto de tratar de mantener la alineación de la óptica sensible en movimiento. El uso de un solenoide de 60 Hz para moverlo horizontalmente, Minsky logrado obtener una velocidad de alrededor de una imagen cada 10 segundos.

Microscopía confocal moderno
Modernos microscopios confocal han mantenido los elementosclave del diseño de las aberturas del agujero de alfiler Minsky y punto por punto de la iluminación de la muestra. Los avances en la óptica y la electrónica se han incorporado en los diseños actuales y proporcionar mejoras en la velocidad, la calidad mago, y el almacenamiento de las imágenes generadas. althoug hay un número de diferentes diseños de microscopio confocal no son marcadamentediferentes. la mayoría de los microscopios confocales imagen fuera de la muestra o mediante la estimulación de la fluorescencia de los tintes aplicados a la muestra. El objetivo de la presente rúbrica será en la microscopía confocal de fluorescencia, ya que el modo que se usa más comúnmente en aplicaciones biológicas. la diferencia entre las dos técnicas es pequeño. hay métodos que implican la transmisiónde luz a través de la muestra, pero éstos son mucho les común.

Fluorescencia si la luz es incidente en una molécula, se puede absorber la luz y luego emitir luz de un color diferente, un proceso conocido como fluorescencia. a temperaturas ordinarias mayoría de las moléculas se encuentran en su estado de menor energía, el estado fundamental. Sin embargo, pueden absorber un fotón de luz queaumentan su estado de energía. Típicamente, la molécula se disipa rápidamente parte de la energía absorbida a través de collinsions con moléculas circundantes no son capaces de aceptar la diferencia de energía más grande necesaria para reducir aún más la molécula a su estado fundamental, puede someterse a la emisión espontánea, perdiendo así la energía restante, emitiendoluz de mayor longitud deonda. fluoresceína es un fluoróforo común que actúa de esta manera. que emite luz verde cuando se estimula con la luz de excitación azul.Las longitudes de onda de la luz de excitación y el color de la luz emitida son material dependiente. microscopía de fluorescencia en el modo tiene varias ventajas sobre los modos reflejada o transmitida. Puede ser más sensible. a menudo, que s posible unir moléculas...