Bioquimica
Páginas: 3 (659 palabras)
Publicado: 12 de noviembre de 2012
TP No6: LIPIDOS HEPÁTICOS : EFECTO DEL AYUNO
Introducción: Los lípidos son compuestos primarios de la células y funcionan como elementos estructurales, de reserva energética, transportadores decarbohidratos en síntesis de glicoproteínas, surfactantes en los alvéolos pulmonares y reguladores de funciones orgánicas como las vitaminas, hormonas esteroides, etc.
Son compuestos químicamenteheterogéneos caracterizados por la presencia de compuestos parafínicos como los ácidos grasos que les confieren la insolubilidad en agua y solubilidad en solventes orgánicos. Según su estructura, susolubilidad puede ser muy variada constituyendo el fundamento de los métodos para su fraccionamiento.
Objetivos:
1) Extraer, cuantificar e identificar lípidos hepáticos de ratones.
2) Compararlos perfiles lipídicos de ratones controles y ayunados.
Metodología
Se realizará la extracción lipídica a partir de 175 µl de homogenato de hígado (control y tratado).
1) Alicuotar los 175 µl enun eppendorf de 2 ml.
2) Agregar 20,5 µl de PCA (ácido perclórico) al 50 % para inhibir la actividad lipasa.
3) Agitar en Vortex 1 min.
4) Agregar 770 µl de CMH (cloroformo : metanol : 1M HCl) 50:100:1.
5) Agitar en Vortex 1 min.
6) Agregar 205,5 µl de NaCl al 0,9 % y 770 µl de cloroformo.
7) Agitar en Vortex 1 min.
8) Centrifugar a 10000 rpm 1 min.
9) Pesar enbalanza analítica un tubo eppendorf de 2 ml limpio y pasar la fase orgánica (inferior) obtenida anteriormente.
10) Agregar 770 µl de TUP (Theoretical Upper Phase of Partition) (cloroformo : metanol :1 M HCl) 3:45:47.
11) Agitar en Vortex 1 min.
12) Centrifugar a 10000 rpm 1 min.
13) Remover la fase superior.
14) Agregar 30 µl de isopropanol.
15) Secar los lípidos en SAVANT (RC off/ medium / vapornet cryopumping).
16) Pesar el tubo eppendorf con los lípidos y calcular el peso (g lípidos/100g tejido).
17) Resuspender los lípidos en 40 µl de cloroformo.
18) Sembrar...
Introducción: Los lípidos son compuestos primarios de la células y funcionan como elementos estructurales, de reserva energética, transportadores decarbohidratos en síntesis de glicoproteínas, surfactantes en los alvéolos pulmonares y reguladores de funciones orgánicas como las vitaminas, hormonas esteroides, etc.
Son compuestos químicamenteheterogéneos caracterizados por la presencia de compuestos parafínicos como los ácidos grasos que les confieren la insolubilidad en agua y solubilidad en solventes orgánicos. Según su estructura, susolubilidad puede ser muy variada constituyendo el fundamento de los métodos para su fraccionamiento.
Objetivos:
1) Extraer, cuantificar e identificar lípidos hepáticos de ratones.
2) Compararlos perfiles lipídicos de ratones controles y ayunados.
Metodología
Se realizará la extracción lipídica a partir de 175 µl de homogenato de hígado (control y tratado).
1) Alicuotar los 175 µl enun eppendorf de 2 ml.
2) Agregar 20,5 µl de PCA (ácido perclórico) al 50 % para inhibir la actividad lipasa.
3) Agitar en Vortex 1 min.
4) Agregar 770 µl de CMH (cloroformo : metanol : 1M HCl) 50:100:1.
5) Agitar en Vortex 1 min.
6) Agregar 205,5 µl de NaCl al 0,9 % y 770 µl de cloroformo.
7) Agitar en Vortex 1 min.
8) Centrifugar a 10000 rpm 1 min.
9) Pesar enbalanza analítica un tubo eppendorf de 2 ml limpio y pasar la fase orgánica (inferior) obtenida anteriormente.
10) Agregar 770 µl de TUP (Theoretical Upper Phase of Partition) (cloroformo : metanol :1 M HCl) 3:45:47.
11) Agitar en Vortex 1 min.
12) Centrifugar a 10000 rpm 1 min.
13) Remover la fase superior.
14) Agregar 30 µl de isopropanol.
15) Secar los lípidos en SAVANT (RC off/ medium / vapornet cryopumping).
16) Pesar el tubo eppendorf con los lípidos y calcular el peso (g lípidos/100g tejido).
17) Resuspender los lípidos en 40 µl de cloroformo.
18) Sembrar...
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