Bioquimica

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN DE AREQUIPA




FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA







GUÍA DE PRÁCTICA
BIOQUÍMICA APLICADA





AUTORES:
Dr. Ing. Raúl Omar Gallegos Jara
Ing. Marcia Juana Quequezana Bedregal
Ing. Karina Moran Medina
Mg. Liz Andrea Gutierrez Quequezana
Mg. Jakeline Zanabria Galvez






AREQUIPA– PERÚ

2012







PROLOGO

Se ha desarrollado la presente Guía de Práctica con el objeto de hacer llegar al interesado los alcances actuales de la bioquímica aplicada en el laboratorio.
Los agigantados pasos del avance del conocimiento humano tienen como base el desarrollo de la biología molecular, lo que a su vez ha generado el desarrollo de la bioquímica como consecuencianatural.
La aplicación de los nuevos conocimientos de la bioquímica han determinado el gran impulso que la bioquímica aplicada ha dado a la nueva tecnología de los bioprocesos.
Todos los avances de la biotecnología tienen como sustento el conocimiento previo de la biología y de la bioquímica aplicada.
La presente Guía de Prácticas brinda a los estudiantes de Ingeniería Química las destrezas básicaspara el empleo de los diferentes instrumentos requeridos para el estudio práctico de la bioquímica.


Los Autores

ÍNDICE


PROLOGO
ÍNDICE
PRÁCTICA 1: DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE PROTEÍNAS.
PRÁCTICA 2: CONCENTRACIÓN DE EXTRACTOS PROTEICOS POR DIÁLISIS.
PRÁCTICA 3: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR MICRO-KJELDAHL.
PRÁCTICA 4: SEPARACIÓN EN CAPA FINA DE UNA MEZCLA DE AMINOÁCIDOS.PRÁCTICA 5: REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS.
PRÁCTICA 6: DETERMINACIÓN DE LAS PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS.
PRÁCTICA 7: METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS: FERMENTACIÓN.
PRÁCTICA 8: INMOBILIZACION DE ENZIMAS Y CELULAS. PRODUCCION DE ETANOL POR Saccharomyces cerevisiae INMOVILIZADA.
PRÁCTICA 9: EXTRACCIÓN DE ENZIMAS VEGETALES.
PRÁCTICA 10: DETERMINACIÓN DE ACTIVIDADENZIMATICA EN UREASA.
PRÁCTICA 11: CINETICA ENZIMATICA EN UREASA.
PRÁCTICA 12: EXTRACCION DE ADN DE HIGADO DE POLLO.

 
PRÁCTICA 1

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE PROTEÍNAS

I. OBJETIVO
Determinar la concentración de una solución de proteínas mediante la reacción de Biuret y el espectrofotómetro
II. FUNDAMENTO:

La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante lareacción del Biuret. El reactivo Biuret contiene CuSO4 en solución alcalina. La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu (+2) y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.






Los compuestos que contienen 2 o más enlaces peptídicos producenun color violeta
Característico con soluciones diluidas de sulfato de cobre (CuSO4) en solución alcalina.
El color se debe al compuesto de coordinación formado al existir enlaces químicos entre los pares de electrones libres del átomo de nitrógeno presente en los enlaces peptídicos de las cadenas proteicas con el ion cobre.

Los espectros de absorción de los complejos entre los iones de Cu+2y las diferentes proteínas son similares pero no idénticas por lo tanto, se puede utilizar una proteína como patrón de calibración. La curva de calibración obtenida por este método, se hará utilizando como patrón solución de peptona, cuya concentración es de 8 mg/mL preparada con agua destilada.

Espectrofotometría. Principios básicos
La reacción de biuret es cuantificable, es decir a mayorconcentración de proteínas, mayor intensidad de color violeta, estas reacciones en las que el color formado es proporcional a la cantidad de sustancia se llaman reacciones colorimétricas.

Midiendo la intensidad de color se podría conocer la concentración de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican técnicas fotométricas, empleando un aparato llamado colorímetro (si mide sólo un...