Biotecnica
Páginas: 19 (4730 palabras)
Publicado: 31 de mayo de 2010
En sentido estricto, in vitro quiere decir “dentro de vidrio”, es decir, el cultivo de plantas o de alguna de sus partes dentro de recipientes de vidrio en condiciones de ambiente controlado.
El estudio de cualquier fenómeno biológico en condiciones de laboratorio exige reproducir de la forma más aproximada posible todos los factores que puedan incidir en el fenómeno estudiado cuando estesucede en la naturaleza. Este principio general se aplica también al cultivo in vitro de plantas.
El cultivo in vitro de plantas superiores es una técnica que exige un control absoluto del ambiente, tanto físico como químico, en el que sitúa al explanto. Conviene por lo tanto conocer cuales son los principales factores que conforman el ambiente del explanto y que deberán ser controlados.
Elmedio de cultivo es la combinación sólida o líquida de nutrientes y agua. Usualmente incluye sales inorgánicas, carbohidratos y vitaminas y aminoácidos. A menudo se denomina Medio Basal y puede ser suplementado con algún regulador de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias.
Los nutrientes son esenciales para el crecimiento y desarrollo de las plantas, sin agua y sin nutrientesminerales una planta no puede vivir in vitro ni in vivo.
Debido a estas necesidades se han desarrollado muchas formulaciones para lo0s medios de cultivo.
• El medio MS o de Murashige y skoog(1962)
• El medio B5 o de Gamborg (1968)
• El medio WPM (1980)
¿QUÉ MEDIO ELEGIR SI NO SE DISPONEN DE REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS?
De Fossard (1976) sugirió un experimento de amplioespectro utilizando 4 grupos de los componentes más frecuentemente vitales en el medio nutritivo:
1. Sacarosa: 1-2-4%
2. Macro-sales diluida: ¼- ½ - 1/1
3. Auxina: 0,01- 0,5-5 mg
4. Citocinina
El pH final del medio de cultivo es un factor importante por diversas razones:
• Valores bajos, inferiores a 3.5 impiden la solidificación de los agentes gelificantesañadidos a los medios sólidos.
• Si la evolución del pH del medio lo hace bajar por debajo de 3.5 se puede producir su licuación.
• El valor del pH puede afectar a la absorción de determinados nutrientes por parte del explante.
• El valor del pH del medio puede afectar al pH del citoplasma y como consecuencia a la actividad de muchos enzimas.
El control del pH inicial del medio yde su dinámica durante el cultivo tienen una gran importancia en el desarrollo del cualquier proyecto de cultivo in vitro.
LA TEMPERATURA
La temperatura a la que está expuesto el explanto cultivado in vitro afecta a la mayoría de procesos fisiológicos y por consiguiente es un factor fundamental a controlar.
EL FOTOPERIODO
Algunos fenómenos propios del desarrollo de las plantas puedenser activados por el número de horas diarias de luz que recibe la planta.
TIPOS DE CULTIVOS IN VITRO
El material vegetal con el que se inicia el cultivo in vitro puede ser cualquier célula, tejido u órgano de la planta. Se puede partir del fragmentos de tallo, raíz, hoja, meristemos, embriones,.. es decir de tejidos fomáticos, pero también se puede iniciar a partir de células o tejidos nosomáticos: anteras, pole, microesporas, óvulos, etc.
Las condiciones de cultivo pueden pretender la proliferación desorganizada de las células del explante hasta dar lugar a un tallo o incluso a un cultivo de células cuando se separan estois del tallo. Una situación particular surge cuando en el explante se producen unas estructuras bipolares que presentan las propiedades morfológicas del losembriones zigótocos.
Estas estructuras se denominan embriones somáticos. Según que estos embriones somáticos surjan directamente del explante o bien de un callo se habla de embriogenésis directa o indireta respectivamente.
MICROPROPAGACIÓN
Micropropagar es el proceso de multiplicar plantas in vitro. A través de la micropropagación, a partir de un fragmento (explante) de una planta madre,...
El estudio de cualquier fenómeno biológico en condiciones de laboratorio exige reproducir de la forma más aproximada posible todos los factores que puedan incidir en el fenómeno estudiado cuando estesucede en la naturaleza. Este principio general se aplica también al cultivo in vitro de plantas.
El cultivo in vitro de plantas superiores es una técnica que exige un control absoluto del ambiente, tanto físico como químico, en el que sitúa al explanto. Conviene por lo tanto conocer cuales son los principales factores que conforman el ambiente del explanto y que deberán ser controlados.
Elmedio de cultivo es la combinación sólida o líquida de nutrientes y agua. Usualmente incluye sales inorgánicas, carbohidratos y vitaminas y aminoácidos. A menudo se denomina Medio Basal y puede ser suplementado con algún regulador de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias.
Los nutrientes son esenciales para el crecimiento y desarrollo de las plantas, sin agua y sin nutrientesminerales una planta no puede vivir in vitro ni in vivo.
Debido a estas necesidades se han desarrollado muchas formulaciones para lo0s medios de cultivo.
• El medio MS o de Murashige y skoog(1962)
• El medio B5 o de Gamborg (1968)
• El medio WPM (1980)
¿QUÉ MEDIO ELEGIR SI NO SE DISPONEN DE REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS?
De Fossard (1976) sugirió un experimento de amplioespectro utilizando 4 grupos de los componentes más frecuentemente vitales en el medio nutritivo:
1. Sacarosa: 1-2-4%
2. Macro-sales diluida: ¼- ½ - 1/1
3. Auxina: 0,01- 0,5-5 mg
4. Citocinina
El pH final del medio de cultivo es un factor importante por diversas razones:
• Valores bajos, inferiores a 3.5 impiden la solidificación de los agentes gelificantesañadidos a los medios sólidos.
• Si la evolución del pH del medio lo hace bajar por debajo de 3.5 se puede producir su licuación.
• El valor del pH puede afectar a la absorción de determinados nutrientes por parte del explante.
• El valor del pH del medio puede afectar al pH del citoplasma y como consecuencia a la actividad de muchos enzimas.
El control del pH inicial del medio yde su dinámica durante el cultivo tienen una gran importancia en el desarrollo del cualquier proyecto de cultivo in vitro.
LA TEMPERATURA
La temperatura a la que está expuesto el explanto cultivado in vitro afecta a la mayoría de procesos fisiológicos y por consiguiente es un factor fundamental a controlar.
EL FOTOPERIODO
Algunos fenómenos propios del desarrollo de las plantas puedenser activados por el número de horas diarias de luz que recibe la planta.
TIPOS DE CULTIVOS IN VITRO
El material vegetal con el que se inicia el cultivo in vitro puede ser cualquier célula, tejido u órgano de la planta. Se puede partir del fragmentos de tallo, raíz, hoja, meristemos, embriones,.. es decir de tejidos fomáticos, pero también se puede iniciar a partir de células o tejidos nosomáticos: anteras, pole, microesporas, óvulos, etc.
Las condiciones de cultivo pueden pretender la proliferación desorganizada de las células del explante hasta dar lugar a un tallo o incluso a un cultivo de células cuando se separan estois del tallo. Una situación particular surge cuando en el explante se producen unas estructuras bipolares que presentan las propiedades morfológicas del losembriones zigótocos.
Estas estructuras se denominan embriones somáticos. Según que estos embriones somáticos surjan directamente del explante o bien de un callo se habla de embriogenésis directa o indireta respectivamente.
MICROPROPAGACIÓN
Micropropagar es el proceso de multiplicar plantas in vitro. A través de la micropropagación, a partir de un fragmento (explante) de una planta madre,...
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