Caracterización molecular del babaco

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CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LOS GENES DE RESISTENCIA DEL HÍBRIDO OBTENIDO A PARTIR DE LA FUSIÓN DE PROTOPLASTOS DE JIGACHO (Vasconcella Stipulatus) Y DEL BABACO (Vasconcella Heilbornii) FRENTE AL HONGO DE PUDRICIÓN Fusarium Oxysporum.

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN PLANTEADO POR LUIS URRESTA DEL OCTAVO NIVEL DE LA CARRERA DE INGENIERIA EN BIOTECNOLOGÍA

TUTOR: PhD. Claudia Segovia.
TIEMPOESTIADO: 8 A 12 MESES
Sangolquí-Ecuador, 2010.

CONTENIDOS:

1) IDENTIFICACIÓN DEL PROBLEMA 3
2) JUSTIFICACIÓN 4
3) ESTUDIO DE FACTIBILIDAD 4
4) OBJETIVOS: 5
4.1 OBJETIVO PRINCIPAL 5
4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 5
5) MATRIZ DE INVOLUCRADOS 7
6) ANÁLISIS DE RUTA CRÍTICA 8
7) MARCO TEÓRICO: 9
7.1 FAMILIA VASCONCELLA 9
7.2DESCRIPCIÓN DEL CULTIVO DEL BABACO 9
7.2.1GENERALIDADES 97.2.2CONDICIONES AMBIENTALES: 10
7.2.3ENFERMEDAD DE LA FUSARIOSIS 11
7.3 CARACTERÍSTICAS DEL JIGACHO. 11
7.4 ASPECTO MOLECULAR 12
7.4.1GENES DE RESISTENCIA 13
7.4.2MARCADORES GENÉTICOS 14
7.4.2.1Polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) 15
7.4.2.2Amplificación aleatoria del ADN polimórfico (RAPD) 15
7.4.2.3Polimorfismo en la longitudde los fragmentos amplificados (AFLP) 16
7.4.3EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ADN 17
7.4.4CUANTIFICACIÓN DE ADN 19
7.4.5REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERAZA (PCR) 19
7.4.6ELECTROFORESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS 20
7.4.7SECUENCIACIÓN DEL ADN 22
7.4.8ANALISIS BIOINFORMÁTICO 22
7.4.9COMPARACIÓN DE SECUENCIAS 22
7.5 DISEÑO ESTADÍSTICO 22
8) MATERIALES Y MÉTODOS 23
8.1MATERIAL VEGETAL 23
8.2 PATOGENO UTILIZADO PARA EVALUAR LA RESISTENCIA 23
8.3 INOCULACIÓN DEL PATOGENO. 23
8.4 IDENTIFICACIÓN DE ENFERMEDAD 23
8.5 EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ADN 24
8.5.1PROTOCOLO 1 24
8.5.2PROTOCOLO 2 24
8.6 ANALISIS MEDIANTE AFLP 24
9) BIBLIOGRAFÍA: 27

IDENTIFICACIÓN DEL PROBLEMA

En el Ecuador, la marchitez vascular del babaco es unaepidemia causada por el hongo Fusarium oxysporum y que generalmente termina con pérdida total de la planta del babaco y con la contaminación del suelo, lo cual es un factor limitante para el cultivo de dicha especie. (Ochoa et al, 2004). Sin embargo existe una de planta denominado jigacho que es de la misma familia de babaco, que tiene la resistencia a dicho agente patológico y el desconocimiento de losgenes involucrados en dicho mecanismo, impiden determinar una nueva metodología para crear nuevas variedades de babaco resistente a esta enfermedad.

El aspectos mas relevante de la presencia del hongo Fusarium oxysporum, en los cultivos de babaco es el desorden a nivel de ecológico ya que el ambiente en el que se desarrolla la planta se ve afectado debido toxicidad del patógeno mencionado tantopara el suelo como para la planta. Sin embargo, existen otros aspectos que derivan de este problema principal tales como el económico, ya que los agricultores y empresarios que se dedican a la producción y comercialización de la fruta se ven afectados debido a la mala calidad de la materia prima.

Es importante destacar que el grado de afectación depende de cuan desarrollada se encuentre laplaga en el cultivo, teniendo mayores afecciones cuando el patógeno se encuentra en etapas de crecimiento muy altas.

JUSTIFICACIÓN

La biotecnología juega un rol importante y preponderante en la identificación de nuevas metodologías para el mejoramiento de cultivos de importancia económica y alimentaria como es el caso del babaco. La investigación en el campo genómico de muchas especies y laayuda de varias tecnologías tales como la electroforesis, la PCR, la secuenciación de genomas y los programas de alineamiento de secuencias, permiten el análisis estructural y funcional del ADN, lo cual facilita la transformación genética de los cultivos, y de esta manera se puede generar un mejoramiento a nivel genético, que va a tener resultados muy satisfactorios para todas las personas...
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