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Técnicas de ADN recombinante: la manipulación genética
A partir de los años 70 se desarrollaron las herramientas de la biología molecular o la ingeniería genética o lo que se ha llamado técnicas del ADN recombinante. Y esto ocurrió, en comparación con lo que fue el resto de la historia de la ciencia, de forma muy rápida entre los años 70 y 80. En estas primeras etapas se estaba trabajando sobrela posibilidad de manipular los genes, es decir: A) tenerlos aislados, B) amplificarlos, en el sentido de tener muchas copias de la misma secuencia, C) conocer la secuencia exacta, es decir el orden de las bases de esos genes D) una vez aislado poderlo expresar fuera de su localización natural, lo cual tendrá una enormidad de otras aplicaciones. Toda esta manipulación genética está simplementebasada en unas pocas propiedades del ADN que han permitido avanzar muchísimo en las técnicas.

Recordemos: el hecho de que el ADN sea una doble cadena, y las cadenas sean

complementarias y que la complementariedad de bases sea un requisito suficiente para que dos cadenas que estaban en simple hebra se

encuentren y se vuelvan a reconstituir es la base de la mayor parte de la manipulación. Dossimples cadenas de ADN reconstituyen una doble cadena unida por puentes de hidrógeno basado

simplemente en la complementariedad de bases, en el hecho de que si en una de las hebras hay una serie de nucleótidos con las bases GCAT cualquier otra hebra que tenga CGTA, es decir complementaria, va a poder unirse y reconstituir una doble cadena en determinadas condiciones de temperatura y de pHdadas. Esta es una de las características básicas. A esto se agrega el hecho de que el ADN tiene la información en el orden de las bases y que el código por el cual esa información es trascripta y traducida a una proteína es prácticamente universal: ese tramo de ADN si es que codifica para algo puede producir esa proteína en diversas condiciones.

Las enzimas de restricción
Uno de los avances másimportante en los inicios de la biología molecular, fue el descubrimiento de las

endonucleasas de restricción, es decir de enzimas que pueden cortar el

ADN y que tienen la ventaja de que lo cortan en sitios concretos. Fueron descubiertas en bacterias, y son enzimas que estas bacterias usan para destruir ADN que ingresa a ellas, por ejemplo ADN de virus bacteriófagos. bacteria puede Con lasenzimas, este la

degradar

ADN

foráneo sin degradar su propio ADN. Varias de ellas fueron identificadas en la década del 70 y siguieron descubriéndose otras posteriormente, aisladas de

ENZIMAS DE RESTRICCION
1965 - Arber y col. 1978 - Smith y Nathan . Premio Nobel

Enzima de tipo II.
Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13) Reconocimiento y corte:

diferentes cepas bacterianas. La ventaja deestas enzimas es que reconocen un sitio para cortar, pueden ser un diseño de 4, 6, 8 bases, pero tienen que estar

GAATTC CTTAAG

----G ---AATTC------CTTAA G---

organizadas con una secuencia exacta y no otra. Por ejemplo, la enzima que se llama EcoR1 (porque se aisló de la bacteria Escherichia coli, que reside normalmente en el intestino), solo corta si encuentra la secuencia GAATTC. Si hayuna base que está cambiada ya no corta.

Estas enzimas de restricción, entonces permiten cortar el ADN en sitios especìficos. Algunas de ellas cortan dejando extremos cohesivos que se pueden pegar nada más que por complementariedad de bases. Esto quiere decir que un extremo que generó una enzima y otro que generó la misma enzima aunque provengan de moléculas de ADN diferentes, se pueden unir ygenerar lo que se llamó inicialmente un ADN recombinante. Este hito de los años 70 de poder recombinar, es decir hacer construcciones genéticas, hacer ingeniería en genética fue la base de una enormidad de otros avances. En 1972 justamente se genera el primer ADN recombinante combinando el ADN de un plásmido, con un tramo de ADN de anfibio.

La clonación
Recordemos que los plásmidos son...
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