Clonacion

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  • Publicado : 2 de diciembre de 2011
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Debido a que un gen es únicamente un pequeño fragmento de ADN, su aislamiento requiere de dos procedimientos: primero se construye una librería genómica que contiene miles defragmentos de ADN derivados del genoma; segundo: el fragmento de ADN que contiene al gen de interés se identifica tomando ventaja de su secuencia.
 

La clonación de un gen a menudo requiere de unalibrería de ADN.

 
Las librerías de ADN pueden tomar una gran variedad de formas, dependiendo de la fuente de ADN. La librería más común es la librería genómica, que se produce cuando el genomacompleto de un organismo es roto en miles de fragmentos y todos ellos se clonan por inserción en un vector de clonación.
 
En el primer paso, el ADN a ser clonado es parcialmentedigerido utilizando una endonucleasa, de tal manera que aparecerán fragmentos de diferentes tamaños. Los tamaños son seleccionados de acuerdo al tamaño del vector de clonación, lo que asegura que lassecuencias estén representadas en la librería.
 
Los fragmentos que son muy grandes o muy pequeños para clonarse, son retirados por centrifugación o electroforesis.
 
El vector declonación es cortado con la misma endonucleasa y ligado a los fragmentos de ADN genómico. La mezcla que contiene al ADN genómico ligado al vector, es utilizada para transformar células bacterianas:de tal manera que se generan bacterias o bacteriofagos que contienen diferentes moléculas recombinantes de ADN. Idealmente, todo el ADN genómico puede ser representado en la librería.
 
Cadabacteria transformada crece en una colonia o clon de células idénticas, debido a que poseen al plásmido recombinante. El reto es identificar al clon que contiene al gen de interés entre cientos deellos. Para considerar la magnitud de este problema analicemos el siguiente ejemplo:
 
Considérese el genoma de un mamífero de 3x109 pb. Si se utiliza un cromosoma artificial bacteriano (BAC)...
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