Colesterol

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COLESTEROL
Fundamento
A finales del siglo XIX Lieberman y Bouchard desarrollaron un método para la determinación de colesterol en sangre humana, el cual aún se utiliza a pesar de su naturalezacorrosiva y de ser susceptible a interferencias.
A mediados de los 70´s Flegg y Richmond comenzaron a trabajar con métodos enzimático. Allain y Roeschlau comenzaron a usar colesterol esterasa y oxidasa,en un reactivo sencillo para determinar colesterol total en suero sanguíneo.
Principio:
Esteres de colesterol col. esterasa colesterol + ácidos grasos
La intensidad del colorrojo formado es directamente proporcional al colesterol total en la muestra cuando se lee a 500 nm.
Interferencia
Algunas drogas y sustancias pueden afectar la determinación de colesterol.
Material1) Reactivo de colesterol
2) Pipetas automatizadas
3) Tubos de ensayo
4) Cronometro
5) Bloqueo térmico
6) Espectrofotómetro capaz de leer a 500 nm

Procedimiento1. Identificar los tubos: blanco, estándar, control, etc.
2. Pipetear 1mL de reactivo en cada tubo. Precalentar a 37 °C por lo menos 5 minutos.
3. Agregar 10µL de suero a sus respectivostubos. Mezclar suavemente.
4. Incubar todos los tubos por 5 minutos.
5. Ajustar el espectrofotómetro a 0 con el blanco (500nm).
6. Leer y anotar observancias.
Notas
Si el espectrofotómetrousado requiere un volumen final mayor a 1mL, use 25µL de muestra y de 3 reactivo.
Sueros lipémicos requieren un blanco de suero: 10µL de suero y 1mL de solución salina; leer y anotar observanciascontra blanco de agua.
Reste el valor obtenido al valor del paciente.
Limitaciones
La prueba es lineal a 700 mg/dL.
Los especímenes arriba de este valor deberán ser diluidos 1:1 con solución salina yreensayados; el resultado debe multiplicarse por 2.
Valores de referencia
Colesterol deseable ˂ 200 mg/dL
Colesterol alto ˃240 mg/dL
Cálculos
mg/dL = | Abs. (desconocido) | * Concentración...
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