Coliformes Totales

Técnica del número más probable en coliformes totales
Norma Oficial Mexicana -112 - ssa1- 1994

1. Introducción
Las bacterias coliformes son un grupo heterogéneo compuesto por varios. Existe poca evidencia que indique que estas bacterias coliformes pertenezcan a un solo género taxonómico.
La falta de certeza en cuanto a su filtración taxonómica y la imprecisa correlación entre los métodosrecomendados para la detección de coliformes han presentado problemas. El primero, es que E. coli es aceptada como bacteria coliformes, la espacie contiene variantes que no producen gas de la lactosa o lo hacen después de 48hr. Por lo que les identifica por medio de esta técnica. Segundo, la capacidad de fermentar la lactosa está frecuente mente asociada e genes localizados en plásmidos. Estosdeterminantes extracromosomales son fácilmente transferidos entre otras bacterias Gram negativas no relacionadas a las coliformes, que pueden, en consecuencia, ser recuperadas en la etapa inicial del análisis. No obstante en la práctica, la técnica ha demostrado su efectividad.
El número de organismos se establece mediante la cuenta de unidades formadoras de colonias o el uso de la técnica delnúmero más probable, también llamada técnica de dilución en tubo, proporciona una estimación estadística de la densidad microbiana presente con base a que la probabilidad de obtener tubos con crecimiento positivo disminuye conforme es menor el volumen de muestra inoculado.

2. Objetivo
Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para estimar el número de coliformes presentes enproductos alimenticios, por medio del cálculo del número más probable (NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio líquido.
Este procedimiento puede aplicarse a agua potable, agua purificada, hielo y alimentos procesados térmicamente, así como a muestras destinadas a evaluar la eficiencia de prácticas sanitarias en la industria alimentaria. Este procedimiento debeseleccionarse cuando la densidad esperada es como mínimo de una bacteria en 10 ml de producto líquido o una bacteria por gramo de alimento sólido.
Cuando la densidad bacteriana sea menor que la aquí citada y si la naturaleza del alimento lo permite, utilizar el método de filtrado en membrana. Si la densidad microbiana se espera sea mayor a 100 por mililitro o gramo de muestra, ampliar el intervalo dediluciones o utilizar el método en placa.

3. Marco teórico
Las bacterias Coliformes. Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfológica y fisiológicamente. Las bacterias Coliformes son bacilos cortos, gramnegativos que fermentan la lactosa y forman ácido y gas son anaerobios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre 30 y 37 ºC, crecen a gran abundancias enmedios corrientes, como caldo y agar la colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de diámetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metálico cuando se observan con luz refleja. Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen emplearse 4 y se han juntado sus iníciales en la palabra nemotécnica(Indol, Rojo Metilo (R.M.), y utilizada de citrato. La reacción de algunas bacterias Coliformes como E.coli produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo. Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O desde el punto de vista sanitario aunque han tratado de diferenciar el tipo fecal (E.coli)y el no fecal (A: aurogenes) análisis sanitario del H2O.

4. Reactivos:
Soluciones diluyentes
Solución reguladora de fosfatos:
• Fosfato monopotásico 34,0 g
• Agua 1,0 l

Agua peptonada:
• Peptona 1,0g
• Cloruro de sodio 8,5g
• Agua 1,01

Caldo lactosado:
• Ingrediente Medio de concentración 1,5 concentración Sencilla
• Extracto de carne 4,5 g 3,0 g
• Peptona de gelatina 7,5 g...