Colimetria.nmp en aguas

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2-Método del Número Más Probable. Colimetría

Se trata de una técnica que permite determinar el número de colibacilos presentes en aguas. La presencia de E. coll Implica que tales aguas han estado en contacto con materia fecales, puesto Que E. coli es un huésped habitual del intestino humano. Tales aguas no deben ser empleadas para el consumo humano, puesto que, pueden ser portadoras
demicroorganismos pat6genos eliminados con 1as heces. .

Toma de muestras

Se realiza en frascos de vidrio de boca ancha, con tap6n esmerilado estériles, teniendo la precaución de llenarlos completamente de agua. La recogida debe hacerse con las máximas precauciones de esterilidad.

Técnica


1-Recuento presuntivo de collformes.( prueba previa)

El recuento presuntivo se realizageneralmente sembrando el agua problema en un medio selectivo y diferencial apropiado .El número de muestras Que se siembran y el volumen de 1as mismas deben ser los adecuado para que mediante métodos estadísticos pueda calcularse el número más probable (NMP) de colibacilos por 100 ml de agua. Se inocularan tantos tubos como indiquen las tablas del NMP seleccionadas y con una cantidad de muestra quetambién indican dichas tablas

Como medio diferencial y selectivo se suele utilizar el de .MacConKey, que lleva un indicador, lactosa y sales biliares que previene el crecimiento de Gram positivas. Los coliformes fermentan la lactosa, produciéndose ácidos ,
que se pondrán de manifiesto por viraje del Indicador y gases, que se acumularán en las campanitas de Durham que llevan los tubos.

Material• Agua problema
• 1 matraz de 250 ml. conteniendo 50 ml de medio líquido de MacConkey al doble de concentracl6n,'con campana de Durham Invertida en su Interior.
• 5 tubos grandes con 10 ml de medio de MacConkey a1 doble de concentración. con campana de Durham.
• 5 –tubos con 5 ml de medio de MacConkey a concentración normal. con campana de Durham.
• Mecheros
•Pipetas estériles

Medio de cultivo:
Caldo lactosado simple. Composición:
• Extracto de carne 3g
• Peptona bacteriológica 5g
• Lactosa 5g
• Agua destilada 1000 ml.

Procedimiento


Consiste en inocular un volumen determinado de cada dilución en igual volumen de caldo de cultivo( según la tabla elegida)


Vol. de agua inoculada(ml)........................................................50................ 10................... 1

Número de frascos inoculados.................................................... 1.................. 5.................... 5




Lectura e interpretación:

Los tubos que presentan ácido y gas Se consideran como presuntos positivos. Aquellos tubos que presenten ausencia de gas al ser incubados durante 48 +/-3 horas, se considerannegativos Comparando la combinaci6n de tubos positivos y negativos y con ayuda de las tablas de probabilidades se puede determinar el NMP de presuntos coliformes, por cada 100 ml de agua .



2- recuento confirmativo de coliformes

Dado que en el agua pueden existir bacterias de origen fecal capaces de fermentar la lactosa en 1as condiciones mencionadas, de cada tubo positivo serealiza la prueba confirmativa. Esta prueba se realiza en paralelo para determinar el NMP de coliformes totales y el NMP de coliformes fecales.Se utilizan medios de cultivo cuya reacción positiva indican presencia inequívoca de coliformes.

A) Prueba confirmativa de coliformes totales.


Para realizar esta prueba, se siembra con asa de platino estéril por agotamiento,desde aquellos tubos que hayan resultado positivos en la prueba anterior, sobre placas petri que contiene medio Agar eosina azul de metileno.Composición del medio de cultivo Levine:
Peptona bacteriológica 10g
Lactosa 10g
Fosfato dipotásico 2g
Agar 15g
Eosina amarillenta 0’4g
Azul de...
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