Coloraciones Microbiologia

Introducción
En general, las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que dificulta su estudiocuando los exámenes se realizan en fresco. Por esta razón, cuando se quieren conocer losdetalles morfológicos es necesario recurrir a tinciones.La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específicapor algún componente celular. Existen varios tipos decolorantes, pero los más usados enmicrobiología

3. Tinciones
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidadde los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la
célula y del colorante. Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interiorde las células y
las tiñen. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta, safranina.
Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las
células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,
nigrosina.
Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una
composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de
forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno,
safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta
composiciónquímica, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo 6
que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de
tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la
tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones
utilizan más de un colorante.
Selectivas. Se basan en elhecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta
composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej;
tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos.
Pueden utilizarse uno o más colorantes.

Tinción de Ziehl-Neelsen
El fundamento de esta técnica diferencial, se basa en la propiedad de laácido-alcoholresistencia de algunas bacterias del orden Actinomycetales, si bien no es privativa de ellas.Estos microorganismos se consideran grampositivos, pero se colorean difícil e irregularmente,de ahí que emplee este tipo de tinción (Ziehl- Neelsen) o su variante (Kinyoun). Cualquiera delas dos técnicas citadas consiguen, ya sea por el calor o aumentando el tiempo de contacto,que la fucsina penetre profundamentey pueda resistir la acción decolorante de una solución deácido-alcohol, apareciendo los bacilos de color rojo sobre un fondo azul (tabla 2)

Objetivos
1. Obtención de cultivos puros de microorganismos mediante estría en medio sólido y
mantenimiento de los mismos en tubos de agar inclinado.
2. Manejo del microscopio óptico de campo claro.
3. Realización de preparaciones húmedas desuspensiones de microorganismos y
tinciones que nos permitirán observar la forma y tamaño de distintos microorganismos,
así como algunas estructuras especiales (esporas en Bacillus y corpúsculos
metacromáticos en Lactobacillus). También realizaremos tinciones diferenciales que nos
permitirán clasificar microorganismos en distintos grupos (tinción de Gram y de ácidoalcohol resistencia).

3.TINCIONES
• Simples
a) Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe
microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están
muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más
intensamente con este colorante que el resto de la célula.
Procedimiento
1. Extensión: poner una gota de agua en el...