Coloraciones

AZUL DE TOLUIDINA
    Colorante que tiñe estructura basófilas, tales como la cromatina. Se puede comportar como colorante ortocromático (tiñe de color azul) o metacromático (tiñe de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de la naturaleza química de la sustancia teñida.
    Como colorante ortocromático, se usa frecuentemente para teñir tejido nervioso, donde tiñe la heterocromatina y losgránulos de Nissl (acúmulos de cisternas de retículo endoplásmico rugoso de los somas neuronales, así como las fibras nerviosas amielínicas y células de glía. También se utiliza para la tinción de cortes semifinos.
    El azul de toluidina tiñe metacromáticamente las estructuras ricas en proteoglucanos sulfatados, como el heparán sulfato, presente - por ejemplo - en el cartílago joven(condroblastos y matriz inmadura) y en los gránulos de las células cebadas.
 
RESULTADOS:
Ortocromasia: las estructuras basófilas aparecen teñidas de color azul.
Imagen: Soma neuronal del asta ventral de la médula espinal de rata.
 

RESULTADOS:
Metacromasia. las estructuras metacromáticas aparecen teñidas de color violeta.
Imagen: CSF de filamento primario branquial de trucha arco iris.

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CORTES SEMIFINOS
    La inclusión de las muestras en resinas plásticas (como el Epon o la Araldita y similares) permite la obtención de cortes de grosor mucho más delgado que en el caso de la parafina. Aunque inicialmente esta técnica de inclusión se usó como un método para seleccionar regiones para la obtención de cortes ultrafinos para lamicroscopía electrónica de transmisión, hoy en día se utiliza frecuentemente para la microscopía  la  óptica, ya que se obtiene una resolución mucho mayor.
   El grosor de los cortes semifinos varía entre 0,5 y 5 m y se tiñen con diversas técnicas como el azul de toluidina o la hematoxilina-eosina. Usando resinas de bajo punto de solidificación es posible realizar también técnicas histoquímicas y deinmunomarcaje.
RESULTADOS: se puede apreciar la mayor resolución de la imagen.
Imagen: CSF de filamento branquial de trucha arco iris (Az. toluidina).

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FOSFATASAS
    Son un grupo de enzimas hidrolíticos que actúan sobre los ésteres del ácido fosfórico. Algunas fosfatasas actúan específicamente sobre un sustrato determinado, por ejemplo laadenosina trifosfatasa, pero la mayoría actúan sobre diversos sustratos y su clasificación se basa en el pH al cual presentan una actividad óptima, diferenciándose dos grupos:
    Fosfatasas alcalinas que exhiben actividad óptima a pH elevado (8,3 – 9,4)
    Fosfatasas ácidas que presentan actividad óptima a pH bajo (4,7 – 5,5)
    Las fosfatasas ácidas se localizan fundamentalmente en loslisosomas, mientras que la localización subcelular de las fosfatasas alcalinas no está clara.
    Para la demostración histoquímica de ambos grupos de fosfatasas, se utiliza como sustrato el naftol-AS-BI-fosfato al pH correspondiente. A continuación, el naftol liberado se demuestra con una sal de diazonio (Fast Red TR para la fosfatasa alcalina y pararrosanilina con nitrito sódico para lafosfatasa ácida). Tras la reacción, los núcleos se contrastan con hematoxilina. En el caso de la fosfatasa ácida, los cortes se deshidratan, se aclaran y se montan con Entellán o DPX. Sin embargo, en el caso de la fosfatasa alcalina no es posible la deshidratación, por lo que las preparaciones se montan con glicerina – gelatina.
    Como en la mayor parte de las técnicas histoenzimáticas, se empleantejidos congelados y cortes obtenidos en criostato, ya que el proceso de deshidratación e inclusión inactivaría los enzimas cuya presencia queremos demostrar. 
 
RESULTADOS:
    Fosfatasa alcalina: las células con actividad fosfatasa alcalina aparecen en rojo.
Imagen: pronefros de trucha arco iris.

    Fosfatasa ácida: las células con actividad fosfatasa ácida aparecen en rojo-anaranjado....