Colorimetria

PRACTICA N°6: COLORIMETRIA

I. INTRODUCCIÓN
La presencia de coliformes totales y fecales es importante para evaluar el control de microbiológico del agua y los productos pesqueros. Para conocer la concentración de esos se usa el método de la colimetria. Este se basa en la fermentación de la lactosa incubada a 37 °C, el cual producirá ácidos y gas el cual se manifestara en los tubos defermentación.
En el presente laboratorio trabajaremos con agua residual proveniente de la granja de la UNALM. La composición del agua de establo es de composición variada, es decir, contiene diferentes tipos de microorganismos. La variada población de microorganismos en esta agua proviene del suelo y de origen intestinal de los animales de la granja.
La presencia y la extensión de contaminación fecales un factor importante en la determinación de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contiene una variedad de microorganismos y formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos patógenos, los cuales son un riesgo para la salud pública al estar en contacto con el ser humano.










II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
Colimetria
El método se basa en que las bacteriascoliformes, fermentan lactosa incubadas a 35 ± 1 °C durante 24 a 48 horas, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de fermentación.
El Método del Número más Probable
El método del NMP, también conocido como el método de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidenciapositiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplea cuando una evaluación cuantitativa de elementos individuales no es factible.
Se basa en la determinación de presencia o ausencia de una determinado tipo de microorganismo (en función de que crezcan o de que produzcan determinada reacción en el medio), en cantidades decrecientes de muestra. La muestra dealimentos se procesa en tres diluciones proporcionales seriadas sembradas en 9 a 15 tubos del medio adecuado, para el método de los 3 ó 5 tubos respectivamente.
Algunas ventajas del NMP son:
La capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosasen una muestra de suelo usando el método de infección de plantas.
Provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados.
Determinar solo organismos vivos y activos metabólicamente.
Suele ser más organismos vivos y activos metabólicamente.
Suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo.
Estemétodo es muy utilizado para la numeración de coliformes totales, fecales y estreptococos; y algunas veces se ha utilizado para la numeración de salmonella, Vibrio y Staphylococcus.



Límites permisibles de calidad de agua
Límites permisibles de características bacteriológicas
El contenido resultante de una muestra de agua, debe ajustarse a lo establecido en la tabla 1. Bajo situaciones deemergencia, las autoridades competentes deben establecer los agentes biológicos nocivos a la salud a investigar.
TABLA 1. LIMITES PERMISIBLES DE CALIDAD DE AGUA
CARACTERISTICAS
LIMITE PERMISIBLE
Organismos coliformes totales
2 NMP/100 ml

2 UFC/100 ml
Organismos coliformes fecales
No detectable NMP/100 ml

Cero UC/100 ml


III. MATERIALES Y MÉTODOS

III.1. MATERIALES

Tubos de ensayoTurbos Durham de 10x75 mm
Pipetas graduadas
Incubadora de 37 °C
Baño María 44.5 ± 0.2 °C
















III.2. MÉTODO
Dilución de la muestra
Para hacer las diluciones se agita, repetidas veces, la muestra. Luego se flamea la boca del frasco, se destapa, se vuelca un poco el contenido y tapado nuevamente, se agita 10 – 15 veces para asegurar la distribución uniforme de...