Concentración de proteína

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Introducción

A través de nuestra historia, y en los últimos tiempos, el estudio de las proteínas ha presentado una verdadera importancia en el ámbito de la ciencia. En algunos campos como el de la agricultura y sobre todo en la medicina, ha conllevado a la determinación de ciertas patologías, ya que estas influyen en la concentración de proteínas. Es por ello que a diario, en laboratorios serealizan estudios de concentración proteica para determinar alguna enfermedad en el campo clínico, o en el caso de la agricultura, para ámbitos de calidad del producto (la cantidad de proteínas presentes, además de otros contenidos nutritivos influyen en sus características como producto final para el consumidor).

En este laboratorio trataremos el tema de la concentración de proteínas en dospartes, donde en la primera abordaremos un problema teórico relacionado con el señalar el método más optimo para determinar la concentración proteica de la muestra, en este caso, el de la sangre y en la segunda parte, donde a partir de datos obtenidos de muestras conocidas expresadas en una curva de calibrado se obtendrá la concentración de una muestra problema. Esta segunda parte va acompañada dedos estudios, uno en el cual se calculará las concentraciones para distintas muestras (vistas en una tabla) con su posterior graficación y en el segundo estudio se ha de determinar el promedio, desviación estándar y límite de confianza para tres muestras problemas.

Problema Teórico: “Determinación de la concentración de proteínas en la sangre”, ¿Qué metodología de cuantificación de proteínasusaría?.

La sangre es un tejido vivo, de tipo fluido, que se encuentra dentro del sistema cardiocirculatorio. En el hombre está formada por un 90% de agua y contiene en solución numerosas sustancias de tipo mineral, además de otros distintos tipos de elementos celulares. Estos elementos son: Glóbulos Rojos, Glóbulos blancos, Plasma y Plaquetas, en los cuales, dentro de sus composicionesbioquímicas se encuentran sustancias como: lípidos, glucosa, aminoácidos, cloruros, sulfatos fosfatos, bicarbonato de sodio, de calcio, de potasio, de magnesio, sales inorgánicas, urea, entre otros. En los glóbulos rojos encontramos la cromoproteína Hemoglobina, uno de los principales constituyentes de este. Dentro de sus funciones están: transportar el oxígeno desde los pulmones hasta las células, y elanhídrido carbónico desde ésta a los pulmones, es por ello su importancia para análisis de laboratorios. Uno de los análisis que realizan cotidianamente es la determinación de la concentración de proteínas, que puede determinar ciertas patologías dependiendo si este valor fluctúa por sobre o bajo la concentración normal, siendo el valor normal presente entre 60 y 80 mg. de proteínas por ml. de sangre.Para nuestra determinación contamos con dos métodos: el de Biuret y el de Lowry, para lo cual debemos tener presente ciertas restricciones y ventajas en los distintos métodos.

El método de Biuret consiste en que al formar complejos los iones cúpricos con los enlaces peptídicos de las proteínas se produce un color violeta-morado bajo condiciones alcalinas. Su sensibilidad es de 0,25 a 200 mgde proteínas por ml. de solución.

Dentro de sus ventajas están:

• Rápido (se puede completar en menos de 30 minutos)

• Es el método más simple de análisis de proteínas

• No es frecuente encontrar derivaciones de color

• Pocas substancias no proteicas interfieren con la reacción de Biuret

• No detecta N2 de fuentes no proteicas o no péptidas.

En susdesventajas encontramos:

• No es muy sensible en comparación con el método de Lowry.

El método de Lowry combina la reacción de Biuret con la reducción del reactivo de Fenol folin-ciocalteau por los residuos de tirosina y triptófano de las proteínas. El color formado es azuloso y su sensibilidad es de 1 a 300 ug. de proteína.

Dentro de sus ventajas están:

• Muy sensible

•...
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