Conservacion de virus y bacterias

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CONSERVACION DE VIRUS Y BACTERIAS
Existen una gran variedad de métodos de mantenimiento y conservación de los microorganismos cuya utilización va a depender en parte del tiempo previsto (Mantenimiento ---->Cortos períodos de tiempo, días; Conservación ----> Largos períodos de tiempo, años) y en parte de las características de los diferentes microorganismos (bacterias, hongos, virus, algas,protozoos).

Los objetivos de las colecciones de los microorganismos son muy simples:
1.- Mantener los cultivos viables a lo largo del tiempo.
2.- Mantener los cultivos puros, sin contaminaciones.
3.- Mantener los cultivos sin cambios en sus características, es decir estables.
II. TECNICAS DE MANTENIMIENTO Y CONSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS
1.- Subcultivo seriado
Consiste en resembrarel microorganismo cada cierto tiempo en un medio adecuado. Este método es válido para cortos períodos de tiempo (semana - 15 días) por lo que deben ser resembrados con frecuencia lo que incrementa el riesgo de contaminación. Además, al mantenerlos a temperatura ambiente, pueden crecer y espontáneamente cambiar sus características genéticas (mutación, pérdida de plásmidos, etc.) que pueden afectaral carácter por el que fueron seleccionados. Estos dos inconvenientes pueden subsanarse en parte enlenteciendo el metabolismo de los microorganismos al mantenerlos a 4°C con lo que su crecimiento es inferior y la necesidad de hacer subcultivos se prolonga a 1 - 3 meses. En microbiología industrial hay que pensar en mantener las colecciones durante períodos de años y no de meses, por lo tanto seutilizan otras técnicas que nos ahorran trabajo y disminuyen los riesgos.
2.- Desecación

La eliminación del agua (deshidratación) es un método de conservación que reduce drásticamente el metabolismo. Sin embargo, no todos los microorganismos sobreviven a estos métodos de secado, por lo que se hace necesario añadir agentes protectores (leche descremada, glutamato sódico al 10%). Una vez secos esimportante mantener el producto sellado (tapón de rosca, ampolla) para evitar el contacto con el aire ya que son higroscópicos.

Los soportes que se suelen utilizar son arena, suelo, sílica gel previamente secados y esterilizados por calentamiento con aire caliente (no utilizar autoclave y sí calor seco). Sobre estos soportes se añade la suspensión de los microorganismos y se deja secar atemperatura ambiente. También se pueden utilizar como soportes discos o tiras de papel, agar, discos de gelatina donde se añade la suspensión de microorganismos y posteriormente se seca al vacío evitando la congelación, lo que se denomina L-secado (L-drying).

Estos métodos de secado son particularmente útiles para conservar microorganismos productores de esporas, p.j. actinomicetos.

3.-Congelación

Al bajar la temperatura hasta el punto de congelación o por debajo de éste se reduce el metabolismo drásticamente hasta el caso de prácticamente anularlo con nitrógeno líquido (-196°C).

Sin embargo, existen una serie de problemas que debemos tener en cuenta. La formación de cristales de hielo pueden romper las células, además al eliminar el agua líquida por convertirse en hielo existe unaconcentración de sales que puede ser perjudicial. Para evitar estos problemas se deben utilizar suspensiones que contengan el mínimo de sales posibles así como utilizar agentes protectores como el glicerol (25%) o dimetilsulfóxido (DMSO c.a. 10%) que neutralizan el efecto de las sales. El realizar el proceso de congelación de una forma rápida o gradualmente no está claro. Algunos recomiendan unabajada gradual (1°C/min) hasta -20°C para posteriormente enfriar rápidamente. Sin embargo, la descongelación debe ser rápida.

Las distintas temperaturas que se utilizan para la conservación de los microorganismos por congelación son:
-30°C: congelador de frigorífico. No se recomienda debido a la formación de eutécticos (suspensión con distintos puntos de congelación debido a los solutos que...
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