Conservación bacterias no filamentosas

Resumen
Objetivo: Elaborar y evaluar un banco de cepas primario (BCP) utilizando glicerol al 25% (v/v) como técnica de congelación (crioprotectante). Materiales y métodos: Se verificó la prueba de pureza de Escherichia coli, realizando posteriormente las diluciones seriadas de 10-1 a 10-8 y se sembraron en superficie 0,1mL en Agar BHI de las diluciones de 10-5 a 10-8, se sometió a incubar a37ºC por 24 horas. Se mezclaron 2mL del caldo BHI con glicerol 50% (v/v) y 2mL de muestra, el volumen final 4mL se repartió en los tres tubos de eppendorf de 1,5mL y se llevó a tres temperaturas (-20ºC, 7ºC y temperatura ambiente). Posteriormente se realizó las lecturas de recuento, la prueba de viabilidad y estabilidad acelerada. Resultados: La prueba de pureza se observó las característicasmicroscópicas y se verificó como Bacilo Gram negativo para E. coli, y posterior a las incubaciones no se obtuvieron los resultados deseados. En los datos de control interno, la lectura de los recuentos obtuvieron: 25X1013UFC/mL a -20ºC , 32X106 UFC/mL a 7ºC , 26X101 UFC/Ml a temperatura ambiente con una población inicial de 29x1013UFC/mL Conclusiones: El mejor método de conservación a prueba deviabilidad acelerada con glicerol al 25% (V/V) entre las tres temperaturas analizadas fue -20ºC, ya que nos dio un gran porcentaje de viabilidad que las otras temperaturas (7ºC y temperatura ambiente). El glicerol es ideal para la congelación, evita la formación de los cristales en el interior de la célula y la deshidratación excesiva.

Introducción
El mantenimiento de los microorganismos consisteen la conservación de ellos y de sus características por largos periodos. A través de los años, se han desarrollado varios métodos de conservación de microorganismos, que se basan en la reducción de su actividad metabólica. La selección del método de conservación depende de varios factores, entre los que se pueden mencionar: susceptibilidad del microorganismo, la facilidad con la que puedanocurrir cambios genéticos en la cepa, número de muestras por conservar, costo de proceso de conservación, periodo durante el cual se desea conservar el microorganismo, probabilidad de contaminación que exista en el medio (1).
La preservación de cepas microbianas no es tarea fácil y debe garantizar la viabilidad, pureza y estabilidad genética de los cultivos, características que coinciden con losobjetivos de un buen método de conservación.  El conocimiento de las peculiaridades de las disímiles técnicas de preservación existentes para su correcta aplicación, así como el seguimiento continúo de las propiedades de las cepas, propician su empleo como inóculo confiable en la industria, la docencia y la investigación (2).
En general, existen 3 categorías en las que se agrupan los métodos depreservación según el tiempo en que permanecen viables las células conservadas, que son los métodos de conservación a largo (son los mejores, ya que garantizan al máximo la estabilidad genética, a él pertenecen los métodos de congelación y la liofilización), mediano (uso de crioprotectantes como aceite mineral, leche descremada, agua, arena para la técnica de congelación) y corto plazos (subcultivo opasaje celular) (2). El objetivo de este estudio es elaborar y evaluar un banco de cepas primario (BCP) utilizando glicerol al 25% (v/v) como técnica de congelación criprotectante.

Materiales y métodos
Microorganismo a analizar: En este estudio fue evaluado: Escherichia coli. Obtenidas en el cepario del Departamento de Microbiología PUJ.
Pruebas de pureza: Se realizó la coloración de Gram almicroorganismo para confirmar la pureza del cultivo.
Determinación de la población inicial a partir de la cual se hace el banco de cepas de trabajo: Se realizaron las diluciones seriadas 10-1 a 10-8, a partir del cultivo de E. coli después de 12 horas de incubar a 37ºC, utilizando una sola pipeta de 1mL y se purgó tres veces entre una dilución y otra. Posterior a esto se sembró en superficie...