cortes histologicos



Cortes Histológicos



Materia:
Histología I


Profesor:
Constanza Mercedes Sánchez Guerra


Alumno:
Julián Andrés Serrano Sosa

Matricula:
907656




Actividad 2

Preparación de tejidos para microscopia óptica.

1. La Técnica Histológica abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes como se conocen, montados bajo un cubreobjeto con imágenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo microscopía óptica o electrónica. Para la obtención de cortes para observar a microscopio, hay que seguir un protocolo en el que se incluye la obtención de la muestra, su corte y montaje.

2. Fijación: Las células se matan con la fijación, para detener los procesos celulares dinámicos con la mayor rapidez posible y mantener laestructura de la célula con los mínimos cambios posibles. Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares con la insolubilización de los componentes estructurales de la célula y la formación de enlaces cruzados, por la acción de distintos agentes químicos, los FIJADORES que de otra manera iniciarían la autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM. La fijación mantiene las estructurasal estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.

3. Lavado: Se hace para eliminar el exceso de fijador, de manera que podamos luego hacer la inclusión sin interferencia por parte del fijador. Existen medios de inclusión que son hidrófobos y precisan de la eliminación de agua en la muestra. Tenemos pues que hacer una deshidratación. Debido a que una gran parte del tejido estáconstituido por agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas de menor a mayor grado de agente deshidratante, por ejemplo, Alcohol Etílico o Acetona. Iniciando con alcohol al 0,5%, luego con una solución de 10%, 20%... 80%, 90%, 95% y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100 % para eliminar el agua. Esto se hace porque si se colocara el tejido en una solución al 100% de alcoholinmediatamente, el agua saldría muy rápida del tejido y se deformaría.

4. Aclaramiento: Luego de deshidratar el tejido, se pasa a una solución de una sustancia que es miscible tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la mayoría de los casos se utiliza como medio de inclusión Parafina líquida). La sustancia comúnmente utilizada es el Xileno o Xileno. De la misma manera secoloca la muestra de tejido en un recipiente de Xileno, que solo es soluble en alcohol al 100%. Se llama aclaramiento ya que el tejido se torna transparente o claro en el xileno, esto se debe a que cambia su índice de refracción. También se pueden utilizar Tolueno, Benzol o Cloroformo como medios de aclaramiento.


5. Inclusión: Por lo general, los tejidos son estructuras blandas y frágiles,incluso después de la fijación. De tal forma que previo a la obtención de los cortes, es necesario incluirlos en un medio de soporte. El medio más utilizado es algún tipo de cera insoluble en agua siendo estas por lo general parafina. En estado líquido, estos medios tienen la capacidad de penetrar y rodear el tejido, de esta forma se puede producir el endurecimiento (por enfriamiento o porpolimerización), para formar un bloque sólido que pueda ser cortado fácilmente en el micrótomo. Existe otro método alternativo, que es la congelación rápida del tejido en un medio gelatinoso, que permite el corte tisular directo del fragmento congelado, que puede ser cortado en forma inmediata en un micrótomo especial denominado criostato. El objetivo de la inclusión es hacer facilitar la sección deltejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la luz y ser examinados mediante el microscopio.
La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado líquido al tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el tejido. Por lo general se coloca la muestra de tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a...