Creatinina directa

Creatinina
directa
Método colorimétrico cinético o de punto final sin desproteinización para la determinación de creatinina en suero y orina SIGNIFICACION CLINICA La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtración renal. Su determinación en suero, así como el clearance de creatinina endógena constituyen parámetros importantes para eldiagnóstico de diversas afecciones renales. Sin embargo, debido a los problemas prácticos inherentes a la determinación del clearance (recolección de orina en niños, etc.), la determinación de creatinina sérica es más utilizada como índice de funcionalismo renal. FUNDAMENTOS DEL METODO La creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el ácido pícrico en medio alcalino dando un complejo colorrojo que se cuantifica mediante lectura fotométrica. La determinación de creatinina puede llevarse a cabo por medio de una técnica de punto final, o por una técnica cinética eliminándose en ambas el color que se debe a los cromógenos no creatinina. En el primer caso, la adición de ácido al medio, destruye el picrato de creatinina pero no el color formado por los demás compuestos. Por lo tanto ladiferencia entre la lectura fotométrica antes y después del agregado de ácido, permite cuantificar la creatinina en forma específica. En la técnica cinética, los cromógenos no creatinina, reaccionan dentro de los primeros 30 segundos de iniciada la reacción, que se comporta como cinética de primer orden para la creatinina. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al iniciode la reacción, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina. REACTIVOS PROVISTOS Standard: solución de creatinina 20 mg/l. Acido Pícrico: solución de ácido pícrico 41,4 mmol/l. Buffer/PLE: solución 0,4% de polioxietilén lauril éter (PLE) en buffer alcalino, pH 12,4. Stopper: ácido acético al 20%. INSTRUCCIONES PARA SU USO Standard: listo para usar. Acido Pícrico: listo para usar.Buffer/PLE: listo para usar. Es posible que a bajas temperaturas se produzca turbidez o algún sedimento. En tal caso, solubilizar totalmente el reactivo dejándolo unos minutos en baño a 37oC antes de pipetearlo. Stopper: listo para usar. Reactivo de Trabajo: mezclar en frasco plástico partes iguales de Acido Pícrico y Buffer/PLE. Rotular y colocar fecha de preparación. PRECAUCIONES Los reactivosson para uso diagnóstico "in vitro". ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos: estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Reactivo de Trabajo: a temperatura ambiente y protegido de la luz es estable 15 días a partir de la fecha de su preparación. MUESTRA Suero u orina a) Recolección: obtener suero de la manera usual. En el caso deorina, obtener orina de 2 hs o de 24 hs empleando un recipiente perfectamente limpio y manteniendo en el refrigerador (2-10oC) durante la recolección. Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma. En caso que la diuresis sea de 2 hs, multiplicar el volumen medido por 12 para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 hs. b) Aditivos: no se requieren. c)Sustancias interferentes conocidas: sueros con concentraciones de bilirrubina mayores a 50 mg/l producen valores erróneos. No interfieren: hemólisis ligera o moderada, hiperlipemia, disproteinemia ni cromógenos no-creatinina (tales como glucosa, ácido ascórbico, cetoácidos, glutatión o ergotionina). Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método. d)Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la creatinina en suero es estable hasta 24 horas y en orina hasta 4 días, en refrigerador sin agregado de conservadores.

• TECNICA DE PUNTO FINAL
MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotómetro o fotocolorímetro. - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados. - Probeta (según el volumen de Reactivo de Trabajo a preparar). - Tubos...