Cristalización de lisozima procedente de huevo (hewl)

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Ingeniería Bioquímica
Universidad de Salamanca

Sara Ruiz Fernández
Gonzalo Martín López
Sara Sánchez Fraile
ÍNDICE

1. LA LISOZIMA 4

2. DEFINICIÓN DEL ESTUDIO 5

3. FUNDAMENTO TEÓRICO
1. CRISTALIZACIÓN Y SOLUBILIDAD 5
2. FASES DEL PROCESO DE CRISTALIZACIÓN 9

4. MÉTODOS DE CRISTALIZACIÓN
1. CRISTALIZACIÓN BATCH 10
2.DIÁLISIS 11
3. DIFUSIÓN EN FASE VAPOR 11
4. MÉTODOS CONTRADIFUSIVOS 12
1. Bases teóricas
1. El transporte de masa en medios contradifusivos 14
2. Precipitación y crecimiento 15
2. Condiciones para el transporte de materia por difusión 16

5. MÉTODOS DE CRISTALIZACIÓN EN GEL:
INSTRUMENTACIÓN Y MATERIALES
1. SELECCIÓN DEL GEL18
1. Geles de sílice 18
2. Geles de azarosa 20
2. PREPARACIÓN DEL GEL DE AGAROSA 22
3. CRISTALIZACIÓN EN BATCH DE UN GEL DE AGAROSA 23
4. MÉTODO DE ACUPUNTURA EN GELES 24
5. EMPLEO DE MEDIOS GELIFICADOS 25

6. RECUPERACIÓN DE LOS CRISTALES 26

7. TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN
DE LOS CRISTALES 27

8.PURIFICACIÓN DE LA LISOZIMA PRESENTE EN
LA CLARA DE HUEVO 29

9. CRISTALIZACIÓN DE LA LISOZIMA
1. Mecanismo de Crecimiento de
los Cristales de Lisozima 31
2. Variables de la Cristalización
de LA Lisozima en Agarosa 32
1. Gel de Agarosa – Tiempo de Inducción 32
2. Gel de Agarosa – Flujo de Nucleación 33
3. Fibras de GelAgarosa – Crecimiento Cristalino 35

9. INFLUENCIA DE UN CAMPO MAGNÉTICO SOBRE LOS CRISTALES
1. Tamaño del Menor Cristal Orientable 36
2. Grado de Orientación 37
3. Efecto sobre el Flujo de Nucleación 38
4. Efecto sobre la Morfología Final
de los Cristales 38

10. CONCLUSIONES Y PERSPECTIVA DE FUTURO 40

11. BIBLIOGRAFÍA 43

1. LALISOZIMA

La lisozima es una proteína que está compuesta por 129 aminoácidos, con un peso molecular de 14.3 kDa y pl 11.3. Su estructura tridimensional presenta un 30.23 % de los aminoácidos implicados en estructuras de α-hélices y un 6.20% en láminas-β, y está estabilizada por la formación de puentes disulfuros.

Figura 1: Estructura tridimensional de la lisozima

La lisozima es unaenzima lítica que hidroliza los enlaces glicosídicos β (1-4) del esqueleto de polisacáridos de peptidoglicanos presentes en la pared bacteriana de las bacterias de tipo gram +. El producto de la hidrólisis genera disacáridos de N-acetil-D-Glucosamina y del ácido N-acetil murámico. También puede ser utilizada para romper las paredes de peptidoglicano de las bacterias gram - en combinación con EDTA,que produce la liberación de los lipopolisacáridos de las paredes celulares de estas bacterias y permite la acción de la lisozima. Debido a esta capacidad, la lisozima es utilizada como bactericida en numerosas aplicaciones industriales y farmacéuticas:

- Como estabilizante en la conservación de alimentos, como por ejemplo en el caso de mostos, vinos, quesos… para evitar el crecimiento debacterias que producen el deterioro de los mismos.

- Como aditivo en la leche de vaca destinada para el consumo de bebés, ya que ayuda en la protección de infecciones intestinales (la leche materna contiene lisozima).

- Como adyuvante de antibióticos en el tratamiento de infecciones bucofaríngeas, como es el caso de estomatitis, gingivitis, faringitis, amigdalitis, laringitis…- Como antivírico en el caso de herpes zoster simple, hepatitis vírica, parotiditis, varicela, sarampión, gripe, queratitis herpética…

- Tiene otros usos médicos, como el de antihistamínico.

Puede obtenerse de diferentes fuentes: huevo, bacteriófagos T4 y λ, leche humana, papaya… siendo la variante más común la lisozima purificada de huevo de gallina (HEWL), tanto para...
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