Cromatografia bidimensional

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  • Publicado : 24 de marzo de 2011
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Reporte de práctica “Separación e identificación de aminoácidos de jugos de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina”

INTRODUCCION
La cromatografía en papel se utiliza mucho como instrumento analítico cualitativo y cuantitativo para controlar e investigar los procesos bioquímicos.Básicamente el procedimiento consta de dos pasos: el primero es el desarrollo o la separación de los componentes por distribución entre dos disolventes y el otro paso incluye la detección o el revelado de los componentes separados. El último paso depende, casi siempre, de una reacción específica de coloración o de otra propiedad de los componentes separados. Por ejemplo, en el caso de los aminoácidos, elpapel se atomiza con una solución de Ninhidrina y se seca en la estufa para que este compuesto reaccione de la siguiente forma:


Esta reacción de coloración, muy sensible, es capaz de detectar cantidades tan pequeñas como 1 µg de aminoácido. La reacción de la Ninhidrina es específica para los aminoácidos y se puede emplear tanto cualitativamente como cuantitativamente.
La cromatografía enpapel bidimensional es empleada para separar mezclas complejas, en este caso para aminoácidos. Esta técnica, se realiza un cromatograma donde la muestra se aplica en una esquina de una hoja de papel de filtro y que el cromatograma se corre en forma paralela a uno de los bordes del papel. Luego de que el cromatograma está completo y el papel se seco, la hoja se rota 90° y se realiza unacromatografía paralele al segundo borde utilizando otro sistema de disolventes. Dado que cada compuesto migra a velocidad característica en un sistema de disolventes determinado, la segunda cromatografía debería incrementar en grado sustancial la separación de la mezcla en sus componentes.

OBJETIVOS
* Separar los aminoácidos presentes en el jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.* Identificación de los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
* Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.

RESULTADOS
1.- Representación de los cromatogramas

Figura 1. Cromatogramas I & II unidimensionales

Figura 2. Cromatogramas III & IV bidimensionales2.- Calculos de los valores de Rf.
Rf= Frente o distancia del solutoFrente o distancia del disolvente
Tabla 1. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles.
Aminoácido | 1° Fase móvil | 2° Fase móvil |
| Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf | Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf |
Met | 7.7 cm | 6.6 cm | 0.857 | 7.8 cm | 4.1cm | 0.525 |His | 7.7 cm | 6.1 cm | 0.792 | 7.8 cm | 0.2cm | 0.025 |
Phe | 7.7 cm | 6.8 cm | 0.883 | 7.8 cm | 4.4 cm | 0.564 |
Pro | 7.7 cm | 4.6 cm | 0.597 | 7.8 cm | 2.7 cm | 0.346 |
Gly | 7.7 cm | 5.3 cm | 0.688 | 7.8 cm | 1.5 cm | 0.192 |
Tyr | 7.7 cm | 6.2 cm | 0.805 | 7.8 cm | 3.5 cm | 0.448 |
Arg | 7.7 cm | 2 cm | 0.259 | 7.8 cm | 0 cm | 0 |
Thr | 7.7 cm | 6.3 cm | 0.818 | 7.8 cm | 2.5cm | 0.320 |
Glu | 7.7 cm | 6 cm | 0.774 | 7.8 cm | 4.3 cm | 0.551 |
Lys | 7.7 cm | 2.7 cm | 0.350 | 7.8 cm | 1.1 cm | 0.141 |

Rf= 6.6 cm7.7 cm =0.857
Rf= 6.1 cm7.7 cm =0.792
Rf= 6.8 cm7.7 cm =0.883
Rf= 4.1 cm7.8 cm =0.525
Rf= 0.2 cm7.8 cm =0.025
Rf= 4.4 cm7.8 cm =0.564

b) Determinar los valores de Rf de cada mancha del cromatograma bidimensional tipo y enlistarlos en ordencreciente de Rf en la primera fase móvil, como se indica en la tabla 2, e identificar, por comparación con los valores de Rf de los cromatogramas unidimensionales, a que aminoácido corresponde cada mancha.
Tabla 2. Cromatograma bidimensional tipo desarrollado en las fases móviles.
No de mancha | 1° Fase móvil | Aminoácido correspondiente | 2° Fase móvil | Aminoácido correspondiente |
| Frente...
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