Cromatografia en capa fina

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  • Publicado : 1 de noviembre de 2011
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Un poco de historia

1906 T s w e t t: Inventó la cromatografía en columna con el uso de solventes puros para
desarrollar un cromatograma, usó adsorbentes suaves para resolver una mezcla de pigmentos,
1938 Izmailov y Schraiber: Describieron el uso de la capa fina de alúmina extendida sobre un vidrio
1951 Kirchner: Introdujo la cromatografía de capa fina como espracticada ahora.
1956 Egon Stahl: Dio el nombre de Cromatografía de Capa Fina. Estandarizó los procedimientos, equipos y adsorbentes dando un auge a la técnica simple, a bajo costo y eficiente.

A modo de introducción.

La cromatografía de capa fina, TLC (Thin layer chromatograhy) es una de las técnicas más simples, pero altamente utilizada como prueba preliminar para evaluación, identificación,verificar pureza y para explorar diferentes parámetros en otros métodos de cromatografía.

La TLC es una técnica bastante fácil donde se utiliza fase estacionarias polares, solidas, y con propiedades absorbentes, soportada por una base de vidrio u otros materiales, la fase móvil debe de ser ligeramente menos polar; esta cromatografía se lleva a cabo dentro de una cámara cromatografica y laregla general que sigue es la siguiente; los compuestos menos polares serán arrastrados por la fase móvil conforme avanza la cromatografía mientras que los más polares serán retenidos por la fase móvil.

Materiales y métodos

Durante esta práctica se realizaron dos experimentos, para ambos se utilizaron dos cámaras de desarrollo cromatografico que diferían en su profundidad, también se utilizaronplacas de vidrio de 20cm x 2.5 cm las cuales tenían una capa fina de silica gel, además se utilizaron micro pipetas para la aplicación de las muestras, la cual era una mezcla homogénea de aminoácidos, como fase móvil se utilizó una mezcla 50% agua 50%metanol para una de las cámaras y en la otra una mezcla 50%agua50%etanol, despues se utilizó ninhidrina al 2% en etanol y una mufla de laboratoriopara revelar los resultados obtenidos

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DESARROLLO:
Lo primero que se hizo fue tomar 4 placas de vidrio ya preparadas con silica, a dos seles marco un frente 1 cm con referencia al borde y a las otras dos 2cm, esta diferencia debido a las profundidades de las cámaras.
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Despues con la ayuda de micro pipetas se fue agregando la mezcla de aminoácidos, se colocaba una gota esperamos aque secara, se colocaba otra gota y asi sucesivamente hasta completar 10 gotas aproximadamente.
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El siguiente paso fue realizar las mesclas para las distintas fases móviles para ello nos auxiliamos de unas probetas de 50ml y vasos de precipitado de 100ml, en una de las cámaras se colocó la mezcla 50% agua 50%metanol y en la otra 50%agua50%etanol. Una vez agregadas las faces móviles setaparon las cámaras con la finalidad de saturarlas.
Despues de esperar 5 min para que la cámara se saturar procedimos a introducir las placas en las cámaras y dejamos que ocurriera la reacción durante una hora.
Al concluir la hora sacamos las placas y lo primero que hicimos fue marcar el frente del solvente dejamos que se secara un poco para después meterlas dentro de una cámara de seguridad ydentro aplicar ninhidrina al 2% en etanol con la ayuda de una pipeta Pasteur uniformemente en toda el área recorrida por la fase móvil.
El último paso fue introducir las placas dentro de la mufla de laboratorio a 60°C esperamos aproximadamente diez minutos y después obtuvimos la separación por bandas de colores
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Resultados

Como ya se mencionó durante esta práctica utilizamos una faseestacionaria de silica gel para llevar acabo la separación de los distintos grupos de aminoácidos, conforme eran arrastrados por las fases estacionarias, al observa la estructura de la silica gel podemos darnos
cuenta de cómo los grupos OH que tiene la silica interacciona con los
aminoácido mas polares y no deja que la fase móvil los siga
arrastrando, mientras que los menos polares o nulamente...
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