Cromatografia en capa fina

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CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS EN CAPA FINA
Planteamiento del Problema
¿ Cuál es y para que sirve la técnica de cromatografía en la aplicación clínica?
Objetivo General
* Aprenderemos la correcta técnica de cromatografía en la aplicación clínica.
Objetivos Específicos
* Aplicaremos losfundamentos teóricos para llevar a cabo cromatografía de aminoácidos.
* Identificar velocidad de migración del aminoácido.

Introducción

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de loscomponentes.

Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plástico (ej: acetato) ó metálicos

(ej: aluminio). Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2.

Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificación de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado.
Lafase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.

Eluyentes más comunes para cromatografía.

-éter de petróleo
-tolueno
-dietil-éter, t-butil-éter
-diclorometano
-acetatode etilo
-n-pentano, n-hexano
-ciclohexano
-tetracloruro de carbono
-éter dietílico
-cloroformo
-acetona
-iso-propanol
-etanol
-metanol
-ácido acético

REVELADORES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante:

• Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar unafase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente, el número que aparece como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado.



• El rocío con una solución de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases).
• Después calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero hastacarbonizar los compuestos.
VENTAJAS DE LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.
La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas:
* El utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menos y la separación es generalmente mejor.

ADSORBENTES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

a) Silica gel
b) Óxido de Aluminio ó Alúmina
c)Celulosa

Para la selección del adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones:

a. Polaridad
b. Tamaño de la partícula
c. Homogeneidad
d. Pureza

FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.
b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sincorrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y después dejar secar completamente antes de aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes.

SILICA GEL
El gel de sílice o ácido silícilico es unode los más utilizados, es débilemente ácido, su pH oscila entre 4 – 5. Suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este factor también se debe tener en cuenta respecto al uso de componentes, el tamaño del grano debe ser de 10 a 40 MICRAS.
Generalmente lleva incorporado un agente aglomerante, yeso, para proporcionar firmeza adsorbente. También han sido incorporados dos indicadores del...
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