Cromatografia en columna

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Reporte práctica 7
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

INTRODUCCIÓN
La cromatografía en capa fina es una técnica para determinar el número de componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una cromatografía en columna, entre otros.
El proceso de cromatografía en columna se controla por cromatografía en capa fina, de tal manera que se puede separar cada componente de la mezcla.La cromatografía en columna se usa para separar grandes cantidades de material: >100 mg. El proceso de cromatografía consta de una fase móvil (eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las sustancias que se deseen separar

OBJETIVOS
a) Conocer la técnica de cromatografía en columna, sus características y los factores que en ella intervienen.

b) Utilizar lacromatografía en columna para la separación de mezclas de compuestos orgánicos.

c) Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de compuestos por cromatografía en columna.

DESARROLLO EXPERIMENTAL
Material por equipo de 2 alumnos
Columna para cromatografía | 1 | Pipeta de 5 ml * | 2 |
Matraz redondo fondo plano 125 ml | 1 | Probeta de 25 ml * | 2 |
T dedestilación | 1 | Piseta de 125 ml c/eluyente | 1 |
Refrigerante p/agua c/mangueras | 1 | Espátula | 1 |
Colector | 1 | Frasco p/cromatografía c/tapa | 3 |
Tapón esmerilado | 1 | Portaobjetos | 6 |
Vaso de pp. de 100 ml | 2 | Tubos capilares | 4 |
Vaso de pp. de 150 ml * | 2 | Frascos “viales” | 8 |
Vidrio de reloj | 1 | Embudo de vidrio | 1 |
Agitador de vidrio | 1 | Pinza de tres dedoscon nuez | 3 |
| | Recipiente eléctrico para B.M. | 1 |
* Graduados | | | |
Sustancias y reactivos
Ácido benzoico | Acetato de etilo |
Azul de metileno | Hexano |
Silicagel para columna | Sulfato de sodio anhidro |
Silicagel para crom. en capa fina | Yodo |

RESULTADOS Y PROCEDIMIENTO
Experimento 1. Purificación de ácido benzoico
Se le proporcionará una mezcla sólida deácido benzoico contaminado con azul de metileno, los cuales se separan por cromatografía en columna.
Para empacar la columna sujétela en el soporte con las pinzas. Si la llave es de vidrio, engrásela ligeramente y mantenga la posición de cerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón ayudándose con la varilla de vidrio, agregue 8 mL de eluyente (acetato de etilo) y presione suavementeel algodón para que quede bien colocado y sin burbujas (Nota 1).
Prepare una suspensión de 10 g de gel de sílice para columna en 40 mL de eluyente y agite por 5 minutos para eliminar las burbujas de aire. A través del embudo de vidrio vierta la suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme.
Abra la llave para eliminar el exceso de disolventeteniendo cuidado de no dejar la gel de sílice sin disolvente (Nota 2).

En un vaso de precipitado de 100 mL disuelva 0.4 g de la mezcla problema con la mínima cantidad de eluyente (4 o 5 mL), ayudándose con el agitador, viértala con cuidado para que quede distribuida uniformemente encima de la superficie de la gel de sílice. Abra la llave para colectar el disolvente y que se adsorba la muestraaplicada (cuidando que no se seque la columna).
Colecte fracciones (eluatos) de 6 mL en los frascos viales y verifique la separación haciendo cromatoplacas (Notas 3 y 4) de cada una de las fracciones usando una muestra testigo como se indica en la figura 1.
Eluya las cromatoplacas en mezcla de hexano-acetato de etilo (2:1) y observe en cuales fracciones hay presencia del compuesto separado (Figura1). En cada cromatoplaca observe el cambio de la coloración de la mancha del producto principal (a menor concentración menor intensidad de color).
La elución y separación termina en el momento en el que ya no se observa en la cromatoplaca presencia del producto separado. En un matraz reúna las fracciones que contienen producto.
Para recuperar la sustancia: destile el exceso de disolvente...
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