Cromatografia intercambio ionico

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CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Hay tres tipos de Fases Estacionarias (Resinas):

I. Resinas de poliestireno entrecruzadas

II. Resinas basadas en Carbohidratos- (CarbohidratosPoliméricos, Agarosa, dextrano, celulosa)

Especialmente usados en la separación de biomoleculas.

III. Soportes basados en la Sílice

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIOIÓNICO

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Tipos Frecuentes de Resinas

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Resina aniónica de distintos tamaños

Mecanismo
Los iones de lassustancias de la mezcla desplazan a los contraiones de la columna. A su vez, ellos compiten con los iones de la FM por los sitios activos n(resina—A-H+) + Bn+ (resina—A-)nBn+ + nH+

[H ] [B ] k= [H ] [B ]+ n + n+ n re n+ re

[H ] k= [H ]
+

+ n

K

re

Donde: K es la cte de distribución y k la de equilibrio

La fuerza del enlace de la muestra depende de:
– Magnitud de la carga » Ley deCoulomb - F α q1q2/r2 3+ >2+ > 1+ – Tamaño del ión hidratado (relacionado con la ecuación de Coulomb)

-Efecto del Amortiguador (Salino)
Los cationes/aniones de la fase móvil pueden desplazar a lamuestra de la columna
Todas las sales NO son iguales

– – –

Aniones: OH- < Cl- < NO3-

< citrate3Cationes: H+ < NH4+ < K+ < Mg2+ < Ca2+
Los polivalentes se sujetan mas fuertemente a lacolumna que los monovalentes

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO Factores que afectan a la retención:
1. Fuerza Iónica

1 I = Σ(mi zi2 ) 2

2. pH . Solo para intercambiadores, aniónicos ocatiónicos, débiles, ya que los fuertes están totalmente disociados. Para aquellos se cumple:

pH (bases) = pK a − 1.5 pH (ácidos) = pK a + 1.5
3. Modificadores Orgánicos.

La elución en gradiente serealiza: 1. mediante cambios en la fuerza iónica
2. mediante cambios en el pH

GRADIENTE: aumentando la concentración de la fase móvil los iones compiten cada vez mas favorablemente con la muestra...
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