Cromatografia por exclusion

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INTRODUCCIÓN

La cromatografía de exclusión por tamaños es una variación de la cromatografía liquido-sólido en la que la fase estacionaria es un material poroso inerte , que permite ladiscriminación entre los solutos según su tamaño y en algunos casos su estructura molecular.
Su fundamento remoto es el tamaño y/o formas de las moléculas, y el próximo la diferenciaentre sus características físicas.

Se basa en que los analitos de mayor tamaño no atravesarán las redes tridimensionales de la fase estacionaria sólida (gel) siendo excluidos, viajandocon la fase móvil al frente de la misma; los analitos de menor tamaño penetrarán y podrán difundirse en el gel, teniendo que entre menor sea su tamaño mas fácil atravesará la faseestacionaria.

Otras interacciones que afectan la velocidad de elución directamente como las interacciones hidrofóbicas que puede tener el soporte con los solutos teniendo que un control estrictode pH y de la fuerza iónica de la fase móvil pueden reducir esta retención.
Vol. de elución A 615nm.
3 0
6 0
9 0
12 0
15 0
18 0.001
21 0.571
24 0.699
27 0.195
30 0.055
33 0.0236 0.013
39 0.008
42 0.005
Interacciones iónicas, los grupos ionizables del soporte pueden originar interacciones electrostáticas con solutos con cargas opuestas netas teniendo queel pH de la fase móvil afecta directamente la existencia de los iones fijos y contrarios en la disolución interna.

RESULTADOS

Tabla 1 determinación del volumen vacío (V0) de lacolumna
Máxima absorbancia en el tubo 9 con un V0 =27 ml.

Datos columna

Diámetro: 1.8 cm
Altura: 25.2cm

VT= π x r2 x h
VT= π x(.9)2 x 25.2= 64.12

Vg=1g de Sephadex --------absorbe 5ml
X = 12.82 --------64.12(VT)

1 g de gel ------2.5 ml
(VT )12.82------Vg =32.06

VT= V0+Vg +Vi
Vi= 62.14 – 32.06 -27 =3.08
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