Cromatografia

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SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME • Figura 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación defluoresceína y azul de metileno
Volumen de Elución 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 66 69 72 75

A493 0.000 1.614 1.902 0.148 0.007 0.003 0.002 0.002 0.002 0.005 0.010 0.0140.050 0.065 0.043 0.027 0.015 0.007 0.003 0.002 0.000 0.001 0.000 0.004 0.000

A668 0.000 0.000 0.001 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.014 1.039 1.500 0.997 0.633 0.351 0.200 0.1170.071 0.045 0.024 0.017 0.019 0.008



Figura 2. Perfil de elución.

2.000 1.800 1.600 1.400 1.200 1.000 A493 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 5760 63 66 69 72 75 A668

absorbancia

volumen de elución (mL)

Figura 2. El punto maximo de absorbancia de la fluoresceína se encuentra a 493 nm, mientras que el del azul de metileno está en 668nm. La pequeña curva generada a 493 nm en el intervalo de 36 a 51 mL de elución nos indica que en azul de metileno también presenta actividad óptica a esta longitud de onda, aunque en menor escala. •Elementos del sistema cromatográfico.

Fase móvil: agua y alcohol ácido Fase estacionaria: alúmina alcalina Solución a separar: mezcla de azul de metileno y fluoresceína disódica Soporte: columnade vidrio



adsorción- La adsorción es un proceso por el cual átomos, iones o moléculas son atrapadas o retenidas en la superficie de un material. [Al2(OH)5]2·CO3·H2O

Alúmina alcalina: Azul demetileno:

Fluoresceína disódica:

Reacción entre el agua y el alcohol ácido: CH3CH2OH + H2O + HCl ------> CH3CH2OH + H3O+ + ClEn un principio, al encontrarse nuestra fase estacionaria encondiciones alcalinas, la fluoresceína es repelida electrostáticamente, por lo que sale rápidamente con agua como eluyente. Después, al cambiar el eluyente por alcohol ácido, se lleva a cabo la reacción...
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