Cromatografia

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PRÁCTICA Nº 12

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE UNA MEZCLA DE AMINOÁCIDOS MEDIANTE CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Fundamento

La separación de aminoácidos por cromatografía en capa fina puedellevarse a cabo empleando diversos tipos de fases estacionarias en la modalidad de cromatografía de adsorción. El gel de sílice es probablemente la fase estacionaria con la que mejores resultados seobtienen.

En esta práctica llevaremos a cabo la separación de tres aminoácidos, fenilalanina, (-alanina y ácido aspártico, empleando gel de sílice como fase estacionaria y una mezcla de propanol/NH3como fase móvil.

NH2 H2N CH2 CH2 COOH

CH2 –CH COOHBeta-Alanina

Fenil-Alanina

HOOC CH2 CH COOH

NH2Ácido aspártico

En este caso, y a continuación del desarrollo cromatográfico es precisa una etapa de revelado, ya que los analitos son incoloros. En dicha etapa se utiliza la ninhidrina como agentede revelado, la cual forma con los aminoácidos un derivado de color azul-violáceo, de acuerdo con la reacción:

Reacción

Reactivos y disoluciones necesarias

- Disoluciones patrón de 1mg.ml-1 de cada uno de los aminoácidos a separar, en etanol del 96% (v/v), siendo a su vez 0.5 M en HCl.
- Fase móvil: n-propanol : NH3 30 % (7 : 3, v/v).
- Disolución de revelado: Ninhidrina al 0.3 %(p/v) en alcohol n-butílico con ácido acético al 3 % (v/v).
- Disolución problema: Disolución que puede contener uno o varios de los aminoácidos seleccionados.

Instrumentación ymaterial necesarios

- Cromatoplacas comerciales de gel de sílice de 0.2 mm de espesor y 10 cm de longitud.
- Cámara de desarrollo.
- Pulverizador para líquido de revelado.
- Estufa termostatada...
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