Cromatografia

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MANUAL DE PRÁCTICAS

1. Tema: CROMATOGRAFÍA
2. Objetivos:
3.1 Objetivo general:
* En esta asignatura se pretende profundizar y completar el estudio de las técnicas separativas cromatográficas y afines, ya que de esta forma los alumnos lleguen a poseer un buen conocimiento y de la importancia que tienen la cromatografía
* Definir técnica cromatográfica, establecer lasdiferentes clasificaciones, conocer la teoría básica de la cromatografía, los parámetros fundamentales y la relación entre ellos.
3.2 Objetivos específicos:
* Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.
* Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la faseestacionaria.
* Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica.
* observar las diferentes características de la placa en la cromatografía.

3. Principio de la prueba :

La palabra cromatografía significa gráfica de colores y fue diseñada por Michael Tswett en el 1903. Tswett llevó a cabo una extracción de una mezcla de pigmentos de hojas verdes y luego pasó esteextracto a través de un tubo de vidrio empacado con carbonato de calcio; de esta forma logró separar los pigmentos presentes en las hojas.
Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de técnicas utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias, en la separación de componentes de las mezclas y en la purificación de compuestos. Esta técnica es muy efectiva y por lo tantose utiliza tanto a nivel de investigación como a nivel industrial.
Este método puede variar de técnica en técnica, pero siempre se basa en el mismo principio: Todos los sistemas de cromatografía contienen una fase estacionaria y una fase móvil.
Se llama cromatografía a una técnica que permite separar (o fraccionar, en lenguaje de laboratorio) los componentes de una mezcla de substanciasbiológicas. El término deriva de chrôma, color, ya que los primeros ensayos del método tuvieron por objeto separar compuestos que eran naturalmente coloreados. En un principio se utilizó la cromatografía para fraccionar e identificar moléculas pequeñas, como aminoácidos o azúcares. En estos casos, se usó la cromatagrafía de partición, que consiste en aplicar una gota de la solución con la mezcla desubstancias a separar en la parte inferior de una tira de papel (cromatografía en papel) o en una delgada capa de un material inerte, como silicagel o celulosa (cromatografía en capa delgada). Luego, el papel o material inerte (los denominaremos soportes) se colocan en un recipiente con un solvente, de manera que, poco a poco, este los vaya impregnando. Dicho solvente es una mezcla de dos líquidos (porejemplo, agua y etanol), que se eligen de manera tal que uno de ellos se adsorba más al soporte que el otro; así, a medida que el solvente avance a lo largo del soporte -los líquidos suben espontáneamente por capilaridad-, aquellos camponentes de la muestra que sean más solubles en el líquido que queda adsorbido serán retenidos, y los que tengan mayor afinidad por el que no se adsorbe seránarrastrados por este. Una vez finalizado el proceso, el soporte se seca y se tiñe con un colorante conveniente, para revelar los compuestos separados, los que se identifican colocando, sobre el mismo soporte, muestras de substancias conocidas.
Una pequeña cantidad de la muestra en disoucion se evpaora cerca del borde del angulo de una tira de papel
La cromatografía en columna utiliza un amplioespectro de adsorbentes sólidos, incluidas la sílice, la alúmina y la sílice gelatinosa. También los líquidos pueden ser adsorbidos en estos sólidos y a su vez sirven como adsorbentes (un proceso denominado cromatografía de reparto) permitiendo al químico elaborar columnas de diferentes propiedades para diversas aplicaciones. En la cromatografía con líquidos de alto rendimiento, una variante de esta...
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